[發明專利]基于基因操作策略構建疾病模型的方法和應用

有效

• 申請號: 201910397466.2
• 申請日: 2019-05-14
• 公開（公告）號: CN110100788B
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 朱獻軍;朱雄;楊牧;李姝錦;楊業明;劉文靜;孫寬祥
• 申請（專利權）人: 電子科技大學附屬醫院·四川省人民醫院
• 主分類號: C12N15/90
• 分類號: C12N15/90
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

本發明公開了一種基于基因操作策略構建疾病模型的方法和應用，涉及生物技術領域。該方法通過基因操作技術使Emc3基因在目標動物的血管內皮細胞或小腦浦肯野細胞中不表達。利用該方法可以得到表現出視網膜新生血管疾病或小腦共濟失調疾病典型特征的疾病動物模型，該方法為構建視網膜新生血管疾病模型或小腦共濟失調疾病模型提供了一種新的思路或策略。此外，由該方法得到的疾病模型也為科研工作者研究視網膜新生血管疾病以及篩選治療視網膜新生血管疾病或小腦共濟失調疾病的藥物提供了模型基礎。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體而言，涉及一種基于基因操作策略構建疾病模型的方法和應用。

背景技術

視網膜新生血管性疾病是我國乃至世界范圍嚴重致盲性眼病之一，主要是指由于新生血管生長伴隨出血、滲出、增生等病理性改變造成的致盲性玻璃體視網膜疾病。包括糖尿病性視網膜病變、視網膜血管阻塞性疾病、視網膜靜脈周圍炎、早產兒視網膜病變等，對我國人群視力健康的威脅日益凸顯。一直以來，關于視網膜新生血管發生的機制眾說紛紜。為此，開展視網膜新生血管性疾病相關免疫學機理的研究，以期尋找可以更早、更有效阻斷RNV進程的作用靶點，具有重要的臨床意義。

目前，國內外實驗室已建立了許多種視網膜新生血管動物模型如：激光光凝誘導視網膜新生血管、高糖飼料或注射鏈脲佐菌素誘導糖尿病視網膜病變、二氧化碳或酸中毒誘導視網膜病變模型以及缺氧誘導的小鼠視網膜缺血模型等。缺氧誘導的小鼠視網膜缺血模型的視網膜血管病理改變與人類新生兒視網膜病變的病理過程高度相似：先是高氧階段的血管閉塞和消失及正常發育中的視網膜血管停止生長,然后是進入空氣相對低氧的環境下,導致缺氧狀態下的視網膜血管異常增殖。此模型制作周期短，動物死亡率低且能產生典型的視網膜新生血管，是理想的模擬視網膜新生血管疾病的動物模型。

共濟失調(Ataxia)是指患者無法維持精細步態、完成精確動作的一種病理狀態。危及小腦或脊髓傳入或傳出神經回路途徑的病變可能導致共濟失調；其中很大一部分由遺傳因素所致，稱為遺傳性共濟失調(Hereditary ataxia，HA)。遺傳性共濟失調具有異質性，至今報道的已有60多種，但尚無統一和公認的分類方法。根據其病發部位可分為四種類型：①深感覺障礙共濟失調；②小腦共濟失調；③前庭迷路共濟失調；④大腦型共濟失調。小腦共濟失調是遺傳性共濟失調主要類型，是—大類具有明顯遺傳異質性的神經系統變性疾病，主要癥狀為行走不穩，肢體無力以小腦癥狀為突出特點，并伴有認知障礙。小腦共濟失調表現有多個遺傳模式，包括常染色體顯性、隱性遺傳，X-連鎖遺傳等多種遺傳模式，另外還包括一些散發病例。目前已發現了30余種小腦共濟失調亞型，約占神經系統遺傳性疾病的10％～15％。

小腦共濟失調的臨床癥狀復雜、交錯重疊，即使同一家族也可表現高度異質性。并且其臨床累及面廣，各型之間臨床表型存在較大的重疊，臨床分型非常困難，因此最終診斷小腦共濟失調須依靠基因檢測。但因其分型眾多，致病基因繁冗復雜，為診斷帶來極大困難。目前尚缺乏針對小腦共濟失調具體有效的治療方法，其主要原因就是缺乏詳細的發病機理研究。其致病基因的發現和致病機理的研究對小腦共濟失調的診斷和治療十分重要。

小腦共濟失調的典型神經病理學改變是小腦萎縮，浦肯野細胞的退行性病變和丟失。浦肯野細胞(Purkinje cell，PC)是從小腦皮質發出的唯一能夠傳出沖動的神經元。PC軸突穿過顆粒層和白質到達深部小腦核團，PC在運動協調中起著重要的作用。由于PC細胞樹突巨大，需要大量的蛋白質合成和能量消耗，易發生病變。內質網應激反應在PC細胞病變中起重要作用。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于基因操作策略構建疾病模型的方法，利用該方法可以得到表現出視網膜新生血管疾病典型特征的疾病動物模型，該方法為構建視網膜新生血管疾病模型提供了一種新的思路或策略。此外，由該方法得到的疾病模型也為科研工作者研究視網膜新生血管疾病以及篩選治療視網膜新生血管疾病的藥物提供了模型基礎。

本發明的另一目的在于提供由上述方法得到的疾病模型的應用。