[發明專利]一種用于治療系統性硬化癥伴隨肢端硬化的臍帶間充質干細胞注射液及其制備方法

在審

• 申請號: 201910390695.1
• 申請日: 2019-05-10
• 公開（公告）號: CN110075125A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發明（設計）人: 陳勇軍;左鳳瓊;楊莉;黃雨
• 申請（專利權）人: 成都康景生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K9/08;A61P17/00;A61P37/02;C12N5/0775
• 代理公司: 北京中索知識產權代理有限公司 11640
• 代理人: 唐亭

1.一種用于治療系統性硬化癥伴隨肢端硬化的臍帶間充質干細胞注射液，其特征在于，包括活性成分臍帶間充質干細胞和輔料；所述輔料包括乳酸鈉林格注射液、ProFreeze細胞凍存液、二甲基亞砜和人血白蛋白；每1mL注射液中含有臍帶間充質干細胞數量0.2×10⁷。

2.如權利要求1所述的臍帶間充質干細胞注射液，其特征在于，乳酸鈉林格注射液的體積分數為45～55％，ProFreeze細胞凍存液的體積分數40～45％，二甲基亞砜的體積分數為5～10％，人血白蛋白的質量分數2.5～7.5％。

3.如權利要求2所述的臍帶間充質干細胞注射液，其特征在于，乳酸鈉林格注射液的體積分數為50％，ProFreeze細胞凍存液的體積分數42.5％，二甲基亞砜的體積分數為7.5％，人血白蛋白的質量分數5％。

4.如權利要求1所述的臍帶間充質干細胞注射液，其特征在于，所述臍帶間充質干細胞代次為第5代，細胞群體倍增水平為15～20。

5.如權利要求1所述的臍帶間充質干細胞注射液，其特征在于，臍帶間充質干細胞注射液使用液氮，低于-150℃保存，有效期為24個月。

6.如權利要求1所述的臍帶間充質干細胞注射液，其特征在于，在臨床輸注之前使用37℃水浴溶解，溶解后30min內使用；輸注方式為靜脈回輸，劑量為1～2×10⁶個/kg體重，療程為每星期輸注1次，共輸注4次。

7.如權利要求1所述的臍帶間充質干細胞注射液，其特征在于，臍帶間充質干細胞凍存前活率大于98％，細胞復蘇后活率大于90％。

8.如權利要求7所述的臍帶間充質干細胞注射液，其特征在于，所述臍帶間充質干細胞注射液包括兩種規格：15ml體積和20mL體積，其中細胞數量分別為3×10⁷和4×10⁷。

9.一種如權利要求1-8任意一項所述的臍帶間充質干細胞注射液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、制備臍帶間充質干細胞，細胞擴增至P5代，收集細胞，進行質量檢測；

S2、配制含二甲基亞砜的ProFreeze細胞凍存液；

S3、配制含人血白蛋白的乳酸鈉林格注射液；

S4、將質量檢測合格的臍帶間充質干細胞重懸在含人血白蛋白的乳酸鈉林格注射液中，制成單細胞懸液；

S5、將單細胞懸液與含二甲基亞砜的ProFreeze細胞凍存液按體積比1：1混合，得到細胞懸液；

S6、將細胞懸液裝入CryoStore凍存袋中，使用液氮，低于-150℃保存。

10.如權利要求9所述的臍帶間充質干細胞注射液的制備方法，其特征在于，所述步驟S1的具體操作如下：

S11、采集臍帶標本，48小時內進行細胞分離；

S12、使用組織塊接種法進行原代細胞的分離和培養，原代細胞的培養和后續細胞擴增均使用無血清無異源培養基；

S13、收獲原代細胞P0，并連續傳代至P2；

S14、收獲P2代細胞，進行質量檢測，檢測合格后進行細胞凍存，此為主細胞庫；

S15、復蘇主細胞庫細胞，進行連續細胞傳代；

S16、細胞擴增至P5代，收集細胞，進行質量檢測，檢測合格后備用。