[發明專利]一種同時檢測GA I和II型尿液異常代謝化合物的方法

在審

• 申請號: 201910387725.3
• 申請日: 2019-05-10
• 公開（公告）號: CN110095542A
• 公開（公告）日: 2019-08-06
• 發明（設計）人: 張萬巧;王艷;封志純;楊堯
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院第七醫學中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 趙靜

1.一種對尿液樣本進行前處理的方法，包括下述步驟：

(1)尿素酶預處理：在尿液樣本中加入尿素酶，然后進行孵育；

(2)將步驟(1)尿素酶處理后的尿液樣本，加入內標十七烷酸及無水乙醇，充分混勻，離心，取上清液，用氮氣吹干，殘余物中加入雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷，進行三甲基硅烷化衍生化處理，即得。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中，所述尿素酶以尿素酶水溶液的形式加入，所述尿素酶水溶液的濃度為30～60 Units/30μl；所述尿液樣本與所述尿素酶溶液的配比為100μl：30μl；所述孵育的條件為：37℃孵育20～45min。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述尿液樣本任選下述一種：

1)新鮮尿液；

2)采集新鮮尿液，8小時以內分裝到EP管，-20℃保存，處理前解凍使用；

3)用濾紙片浸透所述新鮮尿液，于干燥避光處陰干，將得到的干尿濾紙片密封后于-20℃保存；處理前將所述干尿濾紙片放入5ml注射器內，抽取1ml去離子水，室溫靜置5min，反復抽拉針筒，收集尿濾紙片浸出液；其中，所述濾紙為國產新華3號濾紙，規格5×8cm。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，所述尿液樣本與無水乙醇的體積為100μl：1000μl；所述十七烷酸在所述尿液樣本的濃度為200ppm；

所述離心的條件為：13000rpm離心5～10min；

所述雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷的體積比為99:1；

所述尿液樣本的體積與雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷的體積之和的比為100μl：100μl。

5.一種采用GC-MS同時測定尿液中的戊二酸、乙基丙二酸、3羥基戊二酸、2羥基戊二酸、己二酸、辛二酸、癸二酸以及內源性肌酐的方法，包括下述步驟：

a)采用權利要求1-4中任一項所述的方法對尿液樣本進行處理；

b)采用氣相色譜-單四級桿質譜進行分析；

所述氣相色譜-質譜的分析條件如下：

氣相色譜柱為基于亞苯基硅烷固定相的非極性毛細管柱，規格：30m×0.25mmID×0.25μm；

進樣量1μl；分流進樣，其中分流比為20；進樣口溫度250℃；氦氣流速1.0ml/min；恒流；柱溫箱起始溫度60℃，維持2min，以10℃/min的速度升溫至220℃，維持3min；再以15℃/min的速度升溫至325℃，維持5min；離子源溫度280℃，傳輸線溫度300℃，掃面范圍50-550m/z，樣本分析時間33min。

6.一種對尿液樣本進行測定的系統在制備輔助診斷戊二酸尿癥Ⅰ型或II型產品中的應用；

所述對尿液樣本進行測定的系統包括采用權利要求5所述方法對尿液樣本進行預處理和采用氣相色譜-單四級桿質譜進行檢測時所需的各種試劑和/或儀器。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：所述系統包括對尿液樣本進行預處理的系統以及對預處理后的尿液樣本采用氣相色譜-單四級桿質譜進行檢測的系統；

所述對尿液樣本進行預處理的系統包括采用權利要求1-4中任一項所述方法對尿液樣本進行預處理時所需的各種試劑和/或儀器；所試劑包括：尿素酶、十七烷酸、無水乙醇、雙(三甲基硅基)三氟乙酰胺、三甲基氯硅烷；所述儀器包括：孵育設備、離心設備；

所述對預處理后的尿液樣本采用氣相色譜-單四級桿質譜進行檢測的系統包括：氣相色譜-質譜儀、氦氣。