[發(fā)明專利]免疫檢測與細(xì)胞分析用組合檢測卡及聯(lián)合檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910384781.1
• 申請日: 2019-05-09
• 公開（公告）號(hào): CN111912766A
• 公開（公告）日: 2020-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李悅琴
• 申請（專利權(quán)）人: 磐創(chuàng)精準(zhǔn)(北京)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N15/14
• 分類號(hào): G01N15/14;G01N21/78
• 代理公司: 北京尚誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11322
• 代理人: 趙永麗;魯兵

本發(fā)明提供一種免疫檢測與細(xì)胞分析用組合檢測卡及聯(lián)合檢測方法，該組合檢測卡通過檢測卡底殼配合檢測卡上蓋形成的殼體結(jié)構(gòu)將免疫檢測組件和細(xì)胞分析組件集成在一起，殼體上設(shè)有分別向免疫檢測組件和細(xì)胞分析組件加樣的第一加樣孔和第二加樣孔以及透出免疫檢測組件的免疫檢測區(qū)的第一判讀窗以及透出細(xì)胞分析組件的檢測面的第二判讀窗和第三判讀窗，配合聯(lián)合檢測裝置使用，可同時(shí)實(shí)現(xiàn)免疫檢測和細(xì)胞分析功能，為POCT層面同步的免疫與細(xì)胞現(xiàn)場聯(lián)檢提供了基礎(chǔ)條件；該組合檢測卡的細(xì)胞分析組件通過設(shè)置進(jìn)樣缺口、通氣孔、一個(gè)或者厚度不同的多個(gè)測試區(qū)，能夠避免氣泡的產(chǎn)生，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞樣品量的精確控制以及同時(shí)兼顧細(xì)胞計(jì)數(shù)與分型檢測的精密度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種免疫檢測與細(xì)胞分析用組合檢測卡及聯(lián)合檢測方法。

背景技術(shù)

體外診斷是西醫(yī)詢證醫(yī)學(xué)的核心，其通過對患者血液、尿液、唾液等體液樣品的檢測，來獲得患者當(dāng)時(shí)的身體指征，從而為醫(yī)生的診斷提供客觀、明確的量化依據(jù)。伴隨科技的發(fā)展，體外診斷逐漸由臨床檢驗(yàn)科、中心實(shí)驗(yàn)室走向了急診科和ICU等大型醫(yī)院臨床科室、急救車和巡診箱等移動(dòng)醫(yī)療載體以及二甲醫(yī)院和社區(qū)醫(yī)院等多層級(jí)診療場所，甚至走進(jìn)了家庭。由此產(chǎn)生了即時(shí)檢驗(yàn)(Point-Of-Care Test，POCT，也稱現(xiàn)場快速檢測)的概念，即由非專業(yè)人員，在非專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，現(xiàn)場快速的獲得檢驗(yàn)結(jié)果。POCT相關(guān)的技術(shù)產(chǎn)品，以其專業(yè)的性能、靈活的操作，為國家分級(jí)診療體系的建立提供了重要的支持，同時(shí)為針對每個(gè)個(gè)體即時(shí)的健康管理、“治未病”帶來了可能。

針對血液、尿液等體液樣品，檢測靶標(biāo)主要包括樣品基質(zhì)中特定的疾病相關(guān)蛋白以及人體細(xì)胞。一般針對特定蛋白檢測，主流的技術(shù)是基于免疫層析技術(shù)的免疫檢測，即以抗原抗體的特異性識(shí)別為基礎(chǔ)，利用硝酸纖維素膜等固相材料的蛋白吸附力作為抗原抗體探針固定的載體，依托硝酸纖維素膜等固相材料的毛細(xì)虹吸力作為液體樣品涌動(dòng)與反應(yīng)的動(dòng)力，通過抗原抗體上偶聯(lián)生物標(biāo)記物的光、電、磁等信號(hào)，對抗原抗體特異性識(shí)別予以量化的展示；針對人體細(xì)胞分析，常用的儀器是流式細(xì)胞儀和全自動(dòng)血液分析儀，就功能而言都是以細(xì)胞計(jì)數(shù)測量(即“計(jì)數(shù)”)與型別區(qū)分(即“分型”)為主。

其中，流式細(xì)胞儀的核心原理是利用液流系統(tǒng)的樣品管與鞘液管，使鞘液包繞待測樣品以圓形流束高速流動(dòng)，從而將待測細(xì)胞單行排列依次通過激光照射區(qū)，通過對細(xì)胞逐個(gè)進(jìn)行前向散射光、側(cè)向散射光、側(cè)向熒光的分析，最終獲得細(xì)胞的個(gè)數(shù)與型別信息。

全自動(dòng)血液分析儀的計(jì)數(shù)的主流原理是庫爾特原理(稱為電阻抗法)，即懸浮在電解液中的細(xì)胞隨電解液通過小孔管時(shí)，取代相同體積的電解液，在恒電流設(shè)計(jì)的電路中導(dǎo)致小孔管內(nèi)外兩電極間電阻發(fā)生瞬時(shí)變化，產(chǎn)生大小和次數(shù)與細(xì)胞的大小和數(shù)目成正比的電位脈沖，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞計(jì)數(shù)。在庫爾特法前，采用選擇性的溶血?jiǎng)┗蚧瘜W(xué)試劑使其它細(xì)胞破碎、特定細(xì)胞完整，進(jìn)而結(jié)合庫爾特法的計(jì)數(shù)功能，即可實(shí)現(xiàn)分型與計(jì)數(shù)。

這兩種方法都是針對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行分析，因而都可以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞精準(zhǔn)的計(jì)數(shù)與分型，然而兩種方法都存在儀器昂貴、體積較大、操作專業(yè)的問題，不適宜于需要現(xiàn)場或非專門場合下進(jìn)行細(xì)胞分析的情況。

為解決上述問題，在臨床檢驗(yàn)應(yīng)用中，現(xiàn)有的細(xì)胞分析用檢測設(shè)備使用一次性的計(jì)數(shù)片進(jìn)行取樣，該計(jì)數(shù)片的核心結(jié)構(gòu)是由一定間距的兩平行透明薄片及底部包圍形成的敞口的測量腔，測量腔中具有厚度進(jìn)一步減小至～100μm的測量區(qū)。測量腔具有如下的幾個(gè)功能：(1)試劑固定：紅細(xì)胞溶血?jiǎng)?季銨鹽、皂角苷等)和白細(xì)胞顏色染色劑(蘇木精、亞甲藍(lán)等)固定在該測量腔內(nèi)壁上；(2)血液處理：血液樣品通過主動(dòng)吸取的方式進(jìn)入測量腔，在測量腔內(nèi)完成紅細(xì)胞溶血和白細(xì)胞染色；(3)細(xì)胞鋪展：檢測區(qū)的厚度進(jìn)一步減小，使得樣品中的白細(xì)胞盡量在測量區(qū)內(nèi)單層鋪展，便于單個(gè)細(xì)胞分析；(4)檢測銜接：檢測系統(tǒng)透過測量腔的側(cè)壁可以獲得測量區(qū)內(nèi)單層鋪展細(xì)胞的成像。由此，依賴顏色染色劑實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞的計(jì)數(shù)以及基于對細(xì)胞形態(tài)識(shí)別的分型。