[發明專利]提高嵌合抗原受體T細胞療效和作用持久性的細胞培養方法

在審

• 申請號: 201910380701.5
• 申請日: 2019-05-08
• 公開（公告）號: CN110157680A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 黃河;張浩;徐玉林
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明提供一種提高嵌合抗原受體T細胞療效和作用持久性的細胞培養方法，通過添加絡氨酸激酶抑制劑達沙替尼(dasatinib)減少CAR?T細胞活化信號傳遞，抑制了CAR?T細胞的終末分化，提高了CAR?T細胞制品中的初始T細胞和中心記憶T細胞的比例，同時抑制CAR?T細胞的耗竭傾向。本發明方法解決了體外培養過程中CAR?T細胞的終末分化和耗竭傾向的難題。本發明方法培養過程簡單易行，成本低廉，臨床應用安全可靠；培養得到的CAR?T細胞初始T細胞和中心記憶T細胞比例高，并避免了CAR?T細胞的耗竭傾向，重復性好；培養得到的CAR?T細胞展現出更好的治療療效和體內維持持久性，具有廣泛的應用推廣價值。

技術領域

本發明屬于免疫學和細胞治療研究領域，涉及一種提高嵌合抗原受體T細胞療效和作用持久性的細胞培養方法，是應用絡氨酸激酶抑制藥物提高CAR-T細胞中初始T細胞和中心記憶T細胞，減少CAR-T細胞耗竭的培養方法。

背景技術

嵌合抗原受體T(chimeric antigen receptor modified T,CAR-T)細胞免疫療法近年成為免疫靶向治療中最具發展前途的一種治療手段，其作用原理是利用基因工程技術，將能識別某種腫瘤抗原的特異性單鏈單克隆抗體的抗原結合部與T細胞受體的酪氨酸活化基序及共刺激分子在體外偶聯為一個嵌合蛋白，通過病毒載體等方法轉染T細胞，使T細胞能夠特異性識別腫瘤細胞并將信號傳遞至胞內，引起T細胞的增殖活化從而通過釋放穿孔素/顆粒酶靶向殺傷腫瘤細胞，且不受主要組織相容性復合體(MajorHistocompatibility Complex,MHC)的限制。近年來CAR-T治療已應用于白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、腦膠質瘤、黑色素瘤、肺癌、前列腺癌、胰腺癌及卵巢癌等腫瘤。其中在血液系統惡性腫瘤中的研究取得的成績最為矚目。目前已開展針對如CD19、CD22、CD20、CD33、CD30、CD38、BCMA、CD138、CD123等靶點的CAR-T細胞臨床治療研究。其中最顯著的療效主要體現在B細胞來源惡性腫瘤性疾病中的應用，如急性B淋巴細胞白血病(B-ALL)，慢性淋巴細胞白血病(CLL)，多發性骨髓瘤(MM)，B細胞淋巴瘤(B-NHL)等。國際上報道的靶向CD19的CAR-T(CART19)細胞治療難治/復發B-ALL，完全緩解率(CR)達到90％。CAR-T細胞療法在血液腫瘤治療上的突破性進展給該研究領域帶來了新的希望，尤其是傳統治療后無效或復發，在臨床治療決策者束手無策的情況下，CAR-T細胞免疫治療成為最好的治療選擇。

但在接受靶向CD19的CAR-T細胞治療患者中，復發成了CAR-T細胞治療的主要障礙，約30-50％的患者在接受CAR-T細胞治療后復發，且復發大多發生在接受CAR-T細胞治療1年內；而大多數實體瘤予靶向CAR-T細胞治療療效欠佳。目前認為靶向CD19的CAR-T細胞治療后原發病復發主要的原因是CAR-T細胞在體內的丟失，也即不能在體內長期維持；證據顯示，CAR-T細胞治療后患者的長期無病生存與CAR-T細胞在體內的維持時間高度相關。而CAR-T細胞耗竭不僅是靶向CD19的CAR-T細胞治療血液系統腫瘤性疾病后腫瘤復發的重要因素，同時也是治療實體瘤療效欠佳的重要原因。因此開發提高CAR-T細胞療效，延長CAR-T細胞在體內維持的方法，對提高CAR-T細胞治療腫瘤性疾病的療效、防止疾病復發和提高患者長期無病生存率至關重要。