[發明專利]切除炭疽芽胞桿菌中pXO1和pXO2質粒的方法

有效

• 申請號: 201910379859.0
• 申請日: 2019-05-08
• 公開（公告）號: CN110055255B
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 劉先凱;王東澍;王曉景;馮爾玲;朱力;潘超;王恒樑
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/90;C12N1/21;C12R1/07
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 魏少偉

1.切除炭疽芽胞桿菌中pXO1和pXO2質粒的方法，其特征在于：所述方法采用CRISPR/Cas9系統切除出發炭疽芽胞桿菌中pXO1和pXO2質粒，所述CRISPR/Cas9系統中包含名稱分別為sgRNA1和sgRNA2的兩個sgRNA，所述sgRNA1識別的靶序列為pXO1質粒含有而炭疽芽胞桿菌不含有的特異序列；所述sgRNA2識別的靶序列為pXO2質粒含有而炭疽芽胞桿菌不含有的特異序列；

將所述sgRNA1識別的靶序列記為靶序列1，所述靶序列1為序列表中序列3的第1-20位所示的DNA片段；

將所述sgRNA2識別的靶序列記為靶序列2，所述靶序列2為序列表中序列4的第1-20位所示的DNA片段。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述sgRNA1的序列為將序列表中序列3中的T替換為U得到的RNA序列；

所述sgRNA2的序列為將序列表中序列4中的T替換為U得到的RNA序列。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法包括向所述出發炭疽芽胞桿菌中導入含有所述sgRNA1和所述sgRNA2的編碼基因的表達盒，使所述

sgRNA1和所述sgRNA2得到表達，得到切除pXO1和pXO2質粒的炭疽芽胞桿菌。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9系統還包括Cas9蛋白質。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法還包括將含有Cas9蛋白質的編碼基因的表達盒導入所述出發炭疽芽胞桿菌中，使Cas9蛋白質得到表達。

6.成套sgRNA，由權利要求1或2中所述sgRNA1和所述sgRNA2組成。

7.成套生物材料，由名稱分別為生物材料1和生物材料2的兩種生物材料組成；

所述生物材料1為下述C1）至C4）中的任一種：

C1）編碼權利要求1或2中所述sgRNA1的核酸分子；

C2）含有C1）所述核酸分子的表達盒；

C3）含有C1）所述核酸分子的重組載體、或含有C2）所述表達盒的重組載體；

C4）含有C1）所述核酸分子的重組微生物、或含有C2）所述表達盒的重組微生物、或含有C3）所述重組載體的重組微生物；

所述生物材料2為下述D1）至D4）中的任一種：

D1）編碼權利要求1或2中所述sgRNA2的核酸分子；

D2）含有D1）所述核酸分子的表達盒；

D3）含有D1）所述核酸分子的重組載體、或含有D2）所述表達盒的重組載體；

D4）含有D1）所述核酸分子的重組微生物、或含有D2）所述表達盒的重組微生物、或含有D3）所述重組載體的重組微生物。

8.成套產品，為下述X1）或X2）：

X1）成套產品，由權利要求6所述成套sgRNA與Cas9蛋白質組成；

X2）成套產品，由權利要求7所述成套生物材料和與Cas9蛋白質相關的生物材料組成；所述與Cas9蛋白質相關的生物材料為下述E1）至E4）中的任一種：

E1）編碼Cas9蛋白質的核酸分子；

E2）含有E1）所述核酸分子的表達盒；

E3）含有E1）所述核酸分子的重組載體、或含有E2）所述表達盒的重組載體；

E4）含有E1）所述核酸分子的重組微生物、或含有E2）所述表達盒的重組微生物、或含有E3）所述重組載體的重組微生物。

9.權利要求1-5中任一所述方法，或權利要求6所述成套sgRNA，或權利要求7所述成套生物材料，或權利要求8所述成套產品的下述任一應用：

Y1）在制備切除炭疽芽胞桿菌中pXO1和/或pXO2質粒產品中的應用；

Y2）在制備預防和/或治療炭疽芽胞桿菌所致疾病疫苗和/或藥物中的應用。