[發(fā)明專利]鑒別雞快慢羽基因型的方法

有效

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• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN110129453B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設計）人: 李俊英;劉夏儀;鮑海港;吳常信
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發(fā)明提供一種鑒別雞快慢羽基因型的方法。該方法包括：提取待測雞的基因組DNA為模板，利用引物對(SEQ ID NO:1?2)進行PCR擴增，獲得擴增產物，然后用BbvCI內切酶對擴增產物進行酶切，根據酶切產物的片段大小判斷快慢羽基因型。本發(fā)明提供的檢測引物特異性好，內切酶效率高，結果清晰，鑒別準確率高，且能夠解決快慢羽鑒別受時間限制的問題。本發(fā)明能夠準確鑒別雞的快慢羽以及慢羽的純合與雜合型，根據獲得的基因型可以快速建立雛雞自別雌雄配套系。

技術領域

本發(fā)明屬于分子生物學技術領域，具體地說，涉及一種鑒別雞快慢羽基因型的方法。

背景技術

現代養(yǎng)雞生產中采用多種方法區(qū)分初生雛雞的性別，主要有翻肛鑒別法、金銀羽自別雌雄法、快慢羽自別雌雄法等。快慢羽自別雌雄法與金銀羽自別雌雄法相比，有其優(yōu)點，這種方法不受羽色限制，只要父本和母本組合正確，對任何羽色的初生雛雞都可以使用，而金銀羽自別雌雄法，只能在金色羽父本配銀色羽母本時，所產初生雛才可以自別。快慢羽自別雌雄法與翻肛鑒別法相比也有很多優(yōu)點，首先更直觀快捷，只需在雛雞出殼后，用肉眼觀察翅膀上的羽毛生長速度即可，其次雛雞的應激反應小，不易對其造成傷害，而且簡便易學，是目前廣泛使用的自別雌雄的方法。

但快慢羽自別雌雄法也有其適用條件，只有在分別選育出快羽純系和慢羽純系，并進行合理的雜交配套，其后代初生雛雞才能進行快慢羽自別雌雄。在培育快羽純系和慢羽純系的過程中，最初的方法是根據表型鑒別，最適宜的鑒別時間是出雛后24h內，將主翼羽長于覆主翼羽2mm以上的表型劃分為快羽型，其余的全歸為慢羽型。根據表型鑒別存在一定的局限性，首先是有最佳鑒別時間限制；第二是公雞的慢羽表型有純合和雜合兩種基因型，所以僅憑表型鑒別需要至少兩個世代才能培育出慢羽純系，這樣培育快慢羽自別雌雄配套系所需的時間就長，迫切需要用分子生物學方法鑒別雞快慢羽基因型，縮短慢羽純系培育時間、降低養(yǎng)殖成本。

快慢羽的分子鑒定最早是利用與內源性病毒ev21(Endogenous Virus21)之間的相關性，設計了特異性引物，利用PCR技術檢測是否有ev21插入來確定快慢羽表型，但ev21在不同品種中與羽速基因的連鎖程度存在差異，并未達到理想的遺傳標記效果。荷蘭學者Elferink 2008年提出PRLR(prolactin receptor，促乳素受體)和SPEF2(Sperm FlagellarProtein2，編碼精子鞭毛蛋白2)基因串聯的重復片段導致慢羽的形成，然而，黃卓林(雞慢羽基因的精細定位與候選基因研究，2014年，中國農業(yè)大學碩士學位論文)發(fā)現國內一些地方雞種雖然也含有重復片段，但是其表型卻是快羽，因此利用重復片段來鑒別雞快慢羽的方法有待改進。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種鑒別雞快慢羽基因型的新方法。

為了實現本發(fā)明目的，第一方面，本發(fā)明提供用于鑒別雞快慢羽基因型的引物對，包括正向引物F和反向引物R，它們的核苷酸序列分別如SEQ ID NO:1和2所示。

第二方面，本發(fā)明提供含有所述引物對的檢測試劑或試劑盒。

第三方面，本發(fā)明提供所述引物對或含有所述引物對的檢測試劑或試劑盒的以下任一應用：

i)用于鑒別雞快慢羽基因型；

ii)用于雛雞雌雄鑒別。

第四方面，本發(fā)明提供用于鑒別雞快慢羽基因型的方法，提取待測雞的基因組DNA為模板，利用所述引物對進行PCR擴增，獲得擴增產物，然后用BbvCI內切酶對擴增產物進行酶切，根據酶切產物的片段大小判斷快慢羽基因型。

所述基因型的判斷標準如下：酶切產物出現452bp和499bp兩條特征條帶，為快羽純合基因型；酶切產物僅出現951bp一條特征條帶，為慢羽純合基因型；酶切產物出現452bp、499bp和951bp三條特征條帶，為慢羽雜合基因型。

進一步地，采用瓊脂糖凝膠電泳的方法檢測酶切后產物片段的大小。