[發(fā)明專利]基于HPLC指紋圖譜的天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑的質(zhì)量檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910376364.2
• 申請(qǐng)日: 2019-05-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110031564B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚浪群;吳月嬌;董素軍;王微;劉萍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京愛(ài)綠生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/54
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

本發(fā)明提供一種基于HPLC指紋圖譜的天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，包括供試品溶液的制備，綠原酸、咖啡酸、橙皮苷3種對(duì)照品溶液的制備以及HPLC檢測(cè)。本發(fā)明共標(biāo)定了18個(gè)共有峰，其中指認(rèn)3個(gè)已知峰。本發(fā)明首次采用建立HPLC指紋圖譜的方法鑒別天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑產(chǎn)品，該方法建立的天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑HPLC指紋圖譜與對(duì)照?qǐng)D譜的相似度均在90％以上，能有效表征其特點(diǎn)，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量。本發(fā)明技術(shù)含量高，避免了質(zhì)量控制的單一性和片面性；同時(shí)該方法操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可信度高，便于藥材加工、銷售企業(yè)和質(zhì)檢單位推廣應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及高效液相色譜檢測(cè)技術(shù)，具體地說(shuō)，涉及一種基于HPLC指紋圖譜的天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

在禽類養(yǎng)殖中，球蟲(chóng)病是嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)的疾病之一，該病的發(fā)生率極高，分布范圍廣，其病死率可達(dá)40％～80％。愛(ài)綠爽是北京愛(ài)綠生物科技有限公司生產(chǎn)的一種安全高效、無(wú)殘留、不易產(chǎn)生耐藥性的抗球蟲(chóng)飼料添加劑(參見(jiàn)ZL201410832060.X，發(fā)明名稱：一種天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑及其應(yīng)用)。該飼料添加劑能有效抑殺球蟲(chóng)的孢子、第一代及第二代裂殖體，降低其發(fā)病率及避免發(fā)病區(qū)域繼續(xù)擴(kuò)大；同時(shí)提高機(jī)體免疫與抗病力，降低病原球蟲(chóng)對(duì)機(jī)體的侵染；保護(hù)和修復(fù)受損胃腸粘膜，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，具有抑殺球蟲(chóng)、增強(qiáng)免疫力、修復(fù)胃腸道三重功效，該產(chǎn)品綠色環(huán)保，適合在畜牧業(yè)領(lǐng)域大力推廣。

指紋圖譜是指某種天然植物或者植物提取物中所共有的、具有特征性的某類或數(shù)類成分的色譜或者光譜的圖譜。愛(ài)綠爽為天然植物提取物復(fù)方產(chǎn)品，在現(xiàn)階段，天然植物有效成分絕大多數(shù)沒(méi)有明確的情況下，HPLC指紋圖譜對(duì)于天然植物或者植物提取物的質(zhì)量顯得格外重要。因此，建立天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑的HPLC指紋圖譜，對(duì)于產(chǎn)品的質(zhì)量檢驗(yàn)意義重大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種基于HPLC指紋圖譜的天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。

本發(fā)明構(gòu)思如下：天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑(愛(ài)綠爽產(chǎn)品)中，含有黃芪提取物、青蒿提取物、常山提取物、仙鶴草提取物、杜仲提取物、蒲公英提取物、蒼術(shù)提取物、桑葉提取物、蘆薈提取物、陳皮提取物、山楂提取物、甘草提取物等，根據(jù)產(chǎn)品抗球蟲(chóng)機(jī)理，其中有效成分主要為橙皮苷(原藥材陳皮)、咖啡酸(原藥材蒲公英)、綠原酸(原藥材蒲公英)、蘆薈苷(原藥材蘆薈)、黃芪甲苷(原藥材黃芪)、青蒿素(原藥材青蒿)、常山堿(原藥材常山)、甘草酸(原藥材甘草)等，通過(guò)待測(cè)樣品前處理及高效液相色譜流動(dòng)相梯度洗脫后，得到天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑HPLC指紋圖譜18個(gè)共有峰，其中3個(gè)已知峰分別對(duì)應(yīng)于綠原酸、咖啡酸、橙皮苷，其余15個(gè)峰為特征指紋峰。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供一種天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑HPLC指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜，其是以綠原酸、咖啡酸、橙皮苷這3種成分作為特征成分為參照，采用高效液相色譜法測(cè)定其指紋圖譜。所述方法包括制備供試品、對(duì)照品溶液，梯度洗脫以及指紋圖譜建立、對(duì)照?qǐng)D譜生成、特征峰指認(rèn)、相似度計(jì)算等步驟。

本發(fā)明提供的基于HPLC指紋圖譜的天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，具體包括以下步驟：

1)供試品溶液的制備

取天然植物抗球蟲(chóng)飼料添加劑樣品，用甲醇溶解，超聲處理，濾過(guò)，收集濾液，將濾液蒸干，向殘?jiān)屑尤爰状紡?fù)溶并用微孔濾膜過(guò)濾后，作為供試品溶液；

2)3種對(duì)照品溶液的制備

以甲醇為溶劑，分別配制綠原酸對(duì)照品溶液、咖啡酸對(duì)照品溶液和橙皮苷對(duì)照品溶液，濃度分別為0.5～1.5mg/ml、0.2～0.8mg/ml和0.5～1.5mg/ml，優(yōu)選濃度分別為1mg/ml、0.2～0.8mg/ml和0.5～1.5mg/ml；

3)HPLC檢測(cè)