[發明專利]基于HPLC指紋圖譜的天然植物抗球蟲飼料添加劑的質量檢測方法

有效

• 申請號: 201910376364.2
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN110031564B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 姚浪群;吳月嬌;董素軍;王微;劉萍
• 申請（專利權）人: 北京愛綠生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/54
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.基于HPLC指紋圖譜的天然植物抗球蟲飼料添加劑的質量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)供試品溶液的制備

取天然植物抗球蟲飼料添加劑樣品，用甲醇溶解，超聲處理，濾過，收集濾液，將濾液蒸干，向殘渣中加入甲醇復溶并用微孔濾膜過濾后，作為供試品溶液；

2)3種對照品溶液的制備

以甲醇為溶劑，分別配制綠原酸對照品溶液、咖啡酸對照品溶液和橙皮苷對照品溶液，濃度分別為0.5～1.5mg/ml、0.2～0.8mg/ml和0.5～1.5mg/ml；

3)HPLC檢測

色譜條件：AgilentSB-C18色譜柱，規格4.6mm×250mm，5μm；檢測波長322-375nm；柱溫30-45℃；進樣量：5-15μl；流動相A：乙腈，流動相B：0.1％磷酸溶液，流動相A和流動相B濃度之和為100％，進行梯度洗脫；流速0.5-1ml·min^-1；

洗脫條件：

0-10min，流動相A：10-15％，流動相B：90-85％；

10-20min，流動相A：15-18％，流動相B：85-82％；

20-30min，流動相A：18-20％，流動相B：82-80％；

30-40min，流動相A：20-30％，流動相B：80-70％；

40-45min，流動相A：30-10％，流動相B：70-90％；

45-47min，流動相A：10％，流動相B：90％；

將供試品溶液注入高效液相色譜儀，得到HPLC指紋圖譜；同時分別用3種對照品溶液進樣，確定綠原酸、咖啡酸和橙皮苷的出峰位置；測定結果為：共計18個共有峰，其中3、5、11號峰，分別為綠原酸、咖啡酸、橙皮苷，且3號峰為內參照峰，其余15個峰為特征指紋峰；各個峰的相對保留時間分別為3.108、3.988、10.029、10.655、12.672、15.343、18.867、22.379、24.182、28.575、35.540、37.646、38.315、40.767、41.486、41.899、42.551、43.573，平均相對峰面積比分別為2320.555、643.841、9545.936、633.801、4930.843、719.967、1044.565、5439.596、1193.835、812.337、703.755、6692.912、10358.90、8624.709、436.598、833.476、2554.748、7052.612；

步驟1)中取天然植物抗球蟲飼料添加劑樣品2g，用甲醇10-30ml溶解，60W、45Hz超聲處理15-30min；殘渣加入甲醇1-3ml復溶，作為供試品溶液。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、供試品溶液的制備

取天然植物抗球蟲飼料添加劑樣品2g，用甲醇20ml溶解，60W、45Hz超聲處理20min；然后濾過，收集濾液，將濾液蒸干，向殘渣中加入甲醇2ml復溶，作為供試品溶液；

S2、3種對照品溶液的制備

以甲醇為溶劑，分別配制綠原酸對照品溶液、咖啡酸對照品溶液和橙皮苷對照品溶液，濃度分別為1mg/ml、0.5mg/ml和1mg/ml；

S3、HPLC檢測

色譜條件：AgilentSB-C18色譜柱，規格4.6mm×250mm，5μm；檢測波長355nm；柱溫40℃；進樣量：10μl；流動相A：乙腈，流動相B：0.1％磷酸溶液，流動相A和流動相B濃度之和為100％，進行梯度洗脫；流速0.8ml·min^-1；

洗脫條件：

0-10min，流動相A：10-15％，流動相B：90-85％；

10-20min，流動相A：15-18％，流動相B：85-82％；

20-30min，流動相A：18-20％，流動相B：82-80％；

30-40min，流動相A：20-30％，流動相B：80-70％；

40-45min，流動相A：30-10％，流動相B：70-90％；

45-47min，流動相A：10％，流動相B：90％。