[發明專利]一種鏈球菌特異性固體培養基、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201910376265.4
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN109988733A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 譚美芳;李海琴;曾艷兵;康昭風;魏岳
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12Q1/14;C12R1/46
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

本發明屬于微生物技術領域，公開了一種鏈球菌特異性固體培養基、制備方法及其應用，所述鏈球菌特異性固體培養基按質量/體積比例由示蛋白胨10g/L、胰化酪蛋白胨5g/L、酵母提取物5g/L、瓊脂粉15g/L、KCl 2.5g/L、尿素0.06g/L、精氨酸0.1742g/L、萘啶酸20mg/L及任何質量/體積比例的單糖組成。本發明在培養基成分中加入萘啶酸，可解決實驗操作過程中容易發生的染菌問題，同時該固體培養基也可用于鏈球菌的篩選鑒定、分離純化等。

技術領域

本發明屬于微生物技術領域，尤其涉及一種鏈球菌特異性固體培養基、制備方法及其應用。

背景技術

目前，業內常用的現有技術是這樣的：

鏈球菌，特別是條件性致病鏈球菌，如化膿性鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、無乳鏈球菌、變異鏈球菌、豬鏈球菌等，作為共生菌群定植在宿主(人或動物)的口咽腔、上呼吸道、胃腸道和生殖道等黏膜表面，與宿主的免疫系統間維持著動態平衡，對于保證宿主健康具有重要意義。

碳水化合物的種類和豐度是影響菌群平衡的重要環境因素，食物中未消化的淀粉與纖維、發酵產生的葡萄糖與低聚糖、組織血液中的葡萄糖與糖原等是鏈球菌定植或發病時主要的碳水化合物來源，為細菌的生長繁殖提供所需能量和元素，更能調控鏈球菌全基因組的轉錄水平，與鏈球菌的致病性密切相關。因此在研究某種碳水化合物如何影響鏈球菌的基本代謝和毒力時，需要單糖-合成培養基或單糖-半合成培養基來保證細菌生長環境明確、穩定、重現性好。

I.Van De Rijn在1980年提出一種適宜于鏈球菌培養的人工合成液體培養基(I.Van De Rijn and R.E.Kessler,1980,Infection and Immunity)，配方共有47種成分，分為6組進行制備，包含11種無機化合物、21種氨基酸、11種維生素、3種脫氧核糖核酸和1種所需要添加的單糖。該配方由已知成分的純化學藥品組成，成分明確，但是配置過程非常繁瑣，許多成分含量太低不利于準確稱量(如維他命B₁₂的含量為0.1mg/L)，且鏈球菌在一些單糖中生長不良。2008年，Isabella Santi提出一種新的半合成單糖-液體培養基的配方(Santi et al.,2008,PLoS one)，由示蛋白胨、胰化酪蛋白胨、酵母提取物組成，額外添加氯化鉀、尿素、精氨酸和所需的單糖。該配方解決了鏈球菌在淀粉、糖原等單糖條件下生長不良的問題。時至今日，許多相關研究都是建立在上述兩種液體培養基的基礎上。

但是，因為很多單糖(如葡萄糖、果糖、麥芽糖等)是細菌偏愛的速效碳源，其配置而成的單糖培養基易發生染菌現象。另外，適宜于鏈球菌培養的單糖-液體培養基或者單糖-固體培養基僅限于少數實驗室研究使用，市場需求相對較少，因此目前沒有相關商業化產品，也還沒有關于單糖-固體培養基的技術報道。

綜上所述，現有技術存在的問題是：

(1)目前Santi提供的單糖-液體培養基配方沒有明確給出配置方法，且單糖-液體培養基在培養基的配置、細菌培養過程中易發生染菌現象。

(2)沒有適用于鏈球菌培養的單糖-固體培養基的制作技術，因此無法通過劃線培養進行單菌落純化，只能在液體培養基中傳代培養。

解決上述技術問題的難度：

此前的文獻、專利均未提出用于鏈球菌培養的單糖-固體培養基制備技術，也無商業化的產品可參考。

解決上述技術問題的意義：

本發明在Santi提供的液體培養基配方基礎上進行改良，給出一種鏈球菌特異性單糖-固體培養基的制備方法，實現在單糖-固體培養基上進行鏈球菌單菌落純化的研究需求，同時解決單糖培養基易染雜菌的現象。本發明擴大了單糖-固體培養基的應用范圍，不僅適用于研究鏈球菌對某種特定糖類的基礎代謝、生化特性、菌落形態變化等，還可用于鏈球菌的分離鑒定、篩選純化。本發明為單糖-固體培養基的商業化生產提供了技術條件。