[發明專利]一種縮宮素乙酰化雜質的精制方法

有效

• 申請號: 201910375965.1
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN110066319B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 江錫銘;丁金國;黃臻輝
• 申請（專利權）人: 上海上藥第一生化藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/20
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;鄒玲

本發明公開了一種縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其包括下述步驟：采用高效液相反相色譜法將縮宮素乙酰化雜質粗品溶液依次進行反相富集、反相轉鹽、反相純化，即可；所述的高效液相反相色譜法的填料為超耐水填料；所述的反相富集、反相轉鹽、反相純化均是在一步的反相洗脫過程中完成。本發明縮宮素乙酰化雜質的精制方法在純化的過程中產生的廢液大部分為廢水，可經污水站簡單處理就可以重復利用，經濟環保。

技術領域

本發明涉及一種縮宮素乙酰化雜質的精制方法。

背景技術

縮宮素，又稱催產素，英文名為Oxytocin，結構式：

分子式為：C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂，分子量為1007.2

縮宮素用于引產、催產、產后及流產后因宮縮無力或縮腹不良而引起的子宮出血；了解胎盤儲備功能(催產素激怒試驗)；滴鼻可促使排乳。縮宮素能間接刺激子宮平滑肌收縮，模擬正常分娩的子宮收縮作用，導致子宮頸擴張，子宮對縮宮素的反應在妊娠過程中逐漸增加，足月時達高峰。縮宮素也可刺激乳腺的平滑肌收縮，有助于乳汁自乳房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。

就一個藥品而言，其中所含的少量雜質是引發藥品副作用最重要的原因，因此對其純度的檢查是保證藥品安全有效性的重要基礎之一，而純度檢查的內容，根據各個藥物的性質和特點有些不同，但基本上均要涉及各自的“有關物質”檢查研究。合成多肽的有關物質主要來自合成過程中的工藝雜質和由于多肽不穩定而產生的降解產物、聚合物等雜質，盡管目前合成多肽的純化工藝已經有了很大進步，但工藝雜質仍是合成多肽有關物質的重要來源，這主要是由于合成多肽的一些工藝雜質(如缺失肽、斷裂肽、氧化肽、二硫鍵交換的產物等)與藥物本身的性質可能非常近似，從而給純化造成了一定的難度。研究表明合成多肽中最常見的降解產物是脫酰胺產物、氧化產物、水解產物。在組成多肽的各種氨基酸中，天冬酰胺、谷胺酰胺和肽鏈C段酰胺易于發生脫酰胺反應(尤其是在pH值升高和高溫條件下)。

其中，縮宮素乙酰化雜質是縮宮素在合成過程中常見的雜質，該雜質可以在縮宮素質量檢測中作為雜質對照品，因此，制備純度高的縮宮素乙酰化雜質對縮宮素質量控制具有重要意義。

目前多肽藥物常見的純化方法大都采用了制備型高效液相色譜法，該法是獲得高純度多肽目標分子的最有效的方法。一般多肽藥物純化制備工藝設計是先中低壓色譜富集目標多肽，然后高壓色譜精制，但是考慮到目標多肽縮宮素分子量約1kDa，無合適的分子篩凝膠柱(其上樣量小，流速低，處理量小，比較適合分子量大于10kDa蛋白的脫鹽)或超濾膜選擇。而且中低壓色譜中常用的分離方法有分子篩色譜法、離子交換色譜法和疏水相互作用色譜法，這些色譜方法中用到的填料的粒徑通常從幾十微米到幾百微米不等，空隙尺寸多為幾百納米不等，無法得到高純度的目標多肽。采用固相合成+稀釋環化得到的縮宮素乙酰化雜質粗品溶液濃度均比較稀，采用一般的反相色譜柱進行純化時，僅上樣和轉鹽的過程中就產生大量的有機廢液，不能直排或經污水站簡單處理就可以重復利用，尤其是低濃度的樣品純化處理，廢液量更大，危廢的處理費用很高。因此，迫切需要開發新的適合純化低濃度多肽及鹽的經濟有效的工藝。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于為了克服現有技術中縮宮素乙酰化雜質的精制過程中產生大量有機廢液，且危廢液量大，造成的廢液處理成本高，不經濟的缺陷，而提供了一種縮宮素乙酰化雜質的精制方法。本發明精制縮宮素乙酰化雜質的方法在純化的過程中產生的廢液大部分為廢水可經污水處理可直接回用，經濟環保。

本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的：

本發明提供了一種縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其包括下述步驟：

采用高效液相反相色譜法將縮宮素乙酰化雜質粗品溶液依次進行反相富集、反相轉鹽、反相純化，即可；