[發明專利]一種縮宮素乙酰化雜質的精制方法

有效

• 申請號: 201910375965.1
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN110066319B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 江錫銘;丁金國;黃臻輝
• 申請（專利權）人: 上海上藥第一生化藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/20
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 薛琦;鄒玲

1.一種縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于，其包括如下步驟：采用高效液相反相色譜法將縮宮素乙酰化雜質粗品溶液依次進行反相富集、反相轉鹽、反相純化，即可；

所述的高效液相反相色譜法的填料為超耐水填料；所述的超耐水填料為UniSil ODS-AQ超耐水填料；

所述的反相富集、反相轉鹽、反相純化均是在一步的反相洗脫過程中完成；所述的反相富集、反相轉鹽、反相純化的條件如下：

收集保留時間為81~90min的洗脫液即得到縮宮素乙酰化雜質溶液；

所述的流動相A為體積百分比0.005~0.1%的乙酸/水溶液，所述的流動相B為體積百分比0.005~0.1%的乙酸/乙腈溶液，所述的樣品C1為所述的縮宮素乙酰化雜質粗品溶液，所述的流動相C2為5~50mM NH₄Ac-NH₄OH水溶液，所述的流動相C2的pH為7.0~9.0，所述的洗脫液的流速為80~100ml/min；

所述的縮宮素乙酰化雜質粗品溶液中所述的縮宮素乙酰化雜質的結構式為。

2.如權利要求1所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：在40~41min期間，將所述的洗脫液由所述的樣品C1更換為所述的流動相C2；在48~49min期間，將所述的洗脫液由所述的流動相C2更換為所述的流動相A。

3.如權利要求1所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：所述的縮宮素乙酰化雜質粗品溶液為先將固相合成的還原型縮宮素乙酰化雜質粗品溶解、稀釋得到還原型縮宮素乙酰化雜質粗品溶液，再將所述的還原型縮宮素乙酰化雜質粗品溶液氧化而得。

4.如權利要求3所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：所述的還原型縮宮素乙酰化雜質粗品溶液中還原型縮宮素乙酰化雜質粗品的濃度為0.1~4mg/ml。

5.如權利要求4所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：所述的還原型縮宮素乙酰化雜質粗品溶液中還原型縮宮素乙酰化雜質粗品的濃度為0.5~2mg/ml。

6.如權利要求1所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：所述的流動相A為體積百分比為0.02~0.05%的乙酸/水溶液；

和/或，所述的流動相B為體積百分比為0.02~0.05%的乙酸/乙腈溶液；

和/或，所述的流動相C2為10~20 mM NH₄Ac-NH₄OH水溶液；

和/或，所述的流動相C2的pH為7.5~8.5；

和/或，所述的縮宮素乙酰化雜質粗品溶液中所述的縮宮素乙酰化雜質的HPLC純度為60%~85%。

7.如權利要求6所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：所述的縮宮素乙酰化雜質粗品溶液中所述的縮宮素乙酰化雜質的HPLC純度為70%~80%。

8.如權利要求1所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：所述的縮宮素乙酰化雜質粗品溶液中溶劑為含三氟乙酸和乙酸的水溶液。

9.如權利要求1所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：所述的超耐水填料的孔徑為7~10nm，所述的超耐水填料的粒徑為10μm。

10.如權利要求1所述的縮宮素乙酰化雜質的精制方法，其特征在于：所述的高效液相反相色譜法的檢測波長為220nm。