[發明專利]利用雙重數字PCR定量檢測芝麻醬和芝麻蓉中花生成分的方法

有效

• 申請號: 201910375468.1
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN109943627B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 劉津;高東微;董旭婉;李志勇;董潔;關麗軍
• 申請（專利權）人: 廣州海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 劉婉

本發明提供了一種利用雙重數字PCR定量檢測芝麻醬和芝麻蓉中花生成分的方法，其采用雙通道檢測法，利用數字PCR系統同時探測兩種熒光信號，將花生物種特異性基因序列和芝麻物種特異性基因序列檢測的探針分別標記為VIC和FAM，通過在同一PCR反應體系中測得的所述花生物種特異性基因序列和所述芝麻物種特異性基因序列的拷貝數濃度，計算得到花生占芝麻和花生的DNA拷貝數百分比，換算得到花生成分占芝麻和花生成分的質量百分比。本方法可準確、快速地為檢測出芝麻醬和芝麻蓉中花生成分的質量百分比含量，為芝麻醬和芝麻蓉餡料真實性鑒別提供準確可靠的技術數據。

技術領域

本發明屬于分子生物學檢測領域，具體涉及一種利用雙重數字PCR定量檢測芝麻醬和芝麻蓉中花生成分的方法。

背景技術

根據《LS/T 3220-2017芝麻醬》中的規定，芝麻醬是以芝麻為原料，經除雜、清洗和焙炒后，采用研磨等工序制成的產品。芝麻醬的唯一原料應為芝麻或去皮后的芝麻仁。芝麻蓉俗稱麻蓉，是以芝麻、豬油和糖為原料制作的餡料。由于芝麻醬和芝麻蓉制作工藝簡單，市場準入門檻較低，生產企業良莠不齊，部分生產企業為了降低成本，獲得更高的利潤，向芝麻醬和芝麻蓉中進行摻假。最常見的摻假方法是在純芝麻醬中勾兌花生醬和在芝麻蓉中摻入花生蓉，有的甚至使用芝麻香精制作沒有芝麻的芝麻醬和芝麻蓉。這種行為嚴重妨礙公平貿易，損害消費者的利益，影響食品安全。

《LS/T 3220-2017芝麻醬》中規定芝麻醬的檢驗包括感官檢驗、酸值和脂肪含量等質量指標的檢測，不能有效鑒別芝麻醬的真偽。《SN/T 1961.12-2013出口食品過敏原成分檢測第12部分：實時熒光PCR方法檢測芝麻成分》、《SN/T 4419.14-2016出口食品常見過敏原LAMP系統檢測方法第14部分：芝麻》、《SN/T 1961.2-2007食品中過敏原成反檢測方法第2部分：實時熒光PCR法檢測花生成分》和《SN/T 4419.12-2016出口食品常見過敏原LAMP系列檢測方法第12部分：花生》采用實時熒光PCR和等溫擴增技術對芝麻和花生進行定性檢測，僅能解決芝麻醬和芝麻蓉中是否含有花生成分的問題，對芝麻醬和芝麻蓉生產加工過程中由于共用容器、設備和生產線等造成的“無意污染”和以摻假為目的的“有意添加”不能進行有效區分，存在明顯的技術局限性，不能滿足芝麻醬和芝麻蓉打假的需求。

為保障食品安全，維護公平合法貿易，建立芝麻醬和芝麻蓉中花生成分雙重數字PCR定量檢測方法，可對芝麻醬和芝麻蓉中摻入的花生成分進行精準檢測，對芝麻醬和芝麻蓉的真偽鑒別提供準確可靠的技術依據。

發明內容

本發明的目的在于針對以上要解決的缺點與不足，提供一種利用雙重數字PCR準確、有效地定量檢測芝麻醬和芝麻蓉中花生成分的方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種利用雙重數字PCR定量檢測芝麻醬和芝麻蓉中花生成分的方法，其采用雙通道檢測法，利用數字PCR系統同時探測兩種熒光信號，將花生物種特異性基因序列和芝麻物種特異性基因序列檢測的探針分別標記為VIC和FAM，通過在同一PCR反應體系中測得的所述花生物種特異性基因序列和所述芝麻物種特異性基因序列的拷貝數濃度，計算得到花生占芝麻和花生的DNA拷貝數百分比，換算得到花生成分占芝麻和花生成分的質量百分比。

優選地，本發明的方法包括以下步驟：

步驟1.提取芝麻醬或芝麻蓉樣品DNA；

步驟2.設計并合成所述芝麻物種特異性基因序列的引物和探針序列以及所述花生物種特異性基因序列的引物和探針序列；

步驟3.進行雙重數字PCR反應；

步驟4.采用FAM和VIC雙通道熒光檢測讀取并分析熒光信號；

步驟5.根據熒光信號檢測結果計算所述花生占芝麻和花生的DNA拷貝數百分比，換算得到花生成分占芝麻和花生成分的質量百分比；