[發明專利]谷糠過氧化物酶在制備預防和治療動脈粥樣硬化產品中的應用

有效

• 申請號: 201910375308.7
• 申請日: 2019-05-07
• 公開（公告）號: CN110101850B
• 公開（公告）日: 2023-03-10
• 發明（設計）人: 李漢卿;劉豐銘;李卓玉;單樹花
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: A61K38/44
• 分類號: A61K38/44;A61P9/10;A23L33/185
• 代理公司: 太原市科瑞達專利代理有限公司 14101
• 代理人: 劉寶賢

本發明公開了谷糠過氧化物酶在制備預防和治療動脈粥樣硬化產品中的應用。實驗證明，谷糠過氧化物酶可以有效調控人主動脈平滑肌細胞的表型由合成型向收縮型轉變；可以顯著抑制人主動脈平滑肌細胞遷移；可以顯著抑制人主動脈平滑肌細胞吞噬脂質；可以顯著抑制人單核巨噬細胞吞噬脂質；可以減少主動脈病變和升高高密度脂蛋白膽固醇，來抑制小鼠體內動脈粥樣硬化的發生；進而預防和治療動脈粥樣硬化。以谷糠過氧化物酶為主要成分可以用來制備預防和/或治療動脈粥樣硬化的功能食品或藥品等產品。

技術領域

本發明涉及谷糠過氧化物酶的新用途，具體涉及谷糠過氧化物酶在制備預防和/或治療動脈粥樣硬化藥品中的應用。

背景技術

動脈粥樣硬化( Atherosclerosis, AS）是引起心腦血管疾病最主要的原因，而全球每年死于心腦血管疾病人數居于各種死因首位。膽固醇代謝異常、主動脈平滑肌細胞(HASMC)形態轉變，遷移以及吞噬脂質；單核巨噬細胞(THP-1)吞噬脂質等是動脈粥樣硬化形成過程中重要因素。目前臨床上對于動脈粥樣硬化的治療主要以他汀類藥品為主，該類藥品副作用較多，因此，從天然產物中開發預防和/或治療動脈粥樣硬化藥品等產品尤為重要。

谷子（學名：Setaria italica）屬一年禾本科黍族狗尾草屬，起源于我國的黃河流域，是華北地區的主要特產之一。谷子脫殼后即為小米，其脫下的殼就是谷糠。中國專利ZL201210084160.X 公開了一種谷糠抗腫瘤活性蛋白（即谷糠過氧化物酶，命名為：FMBP）及其制備方法，以及該蛋白在制備抗腫瘤藥物中的應用。但將該蛋白用于預防和/或治療動脈粥樣硬化沒有研究和報道。

發明內容

本發明的目的在于提供谷糠過氧化物酶的新用途，具體提供谷糠過氧化物酶在制備預防和/或治療動脈粥樣硬化藥品中的應用。

本發明提供的谷糠過氧化物酶在制備預防和/或治療動脈粥樣硬化的藥品中的應用，所述谷糠過氧化物酶可按照中國專利 ZL201210084160.X 公開的方法制備得到。

谷糠過氧化物酶的制備步驟：

第一步：取谷糠，粉碎后，加入預冷的蛋白提取液，4℃下浸泡并攪拌12-16小時，離心后取上清液，即為谷糠蛋白粗提液；所述的蛋白提取液為 20mmol/L Tris-HCl溶液，含0.85%NaCl，1mmol/L PMSF，pH8.0；所述的谷糠和蛋白提取液的重量體積比為1︰4-6，其中重量的單位為g，體積的單位為mL；

第二步：在谷糠蛋白粗提液中加入2-3倍體積的-20℃預冷的丙酮，沉淀蛋白1-2小時，離心，收集沉淀，在-20℃下放置，使丙酮完全揮發，冷凍干燥，得到谷糠粗蛋白；

第三步：將谷糠粗蛋白用pH8.0、20mmol/L Tris-HCl緩沖液溶解，離心后取上清液，按0℃下硫酸銨溶液飽和度計算表，先加入硫酸銨粉末，達到30%飽和度，充分攪拌溶解后，靜置，離心，收集上清液，再向上清液中加入硫酸銨粉末，達到85%飽和度，充分攪拌溶解后，靜置，離心，收集沉淀，用pH8.0、20mmol/L Tris-HCl緩沖液溶解、透析、濃縮即得到谷糠過氧化物酶粗蛋白；

第四步：將谷糠過氧化物酶粗蛋白用pH8.0、20mmol/L Tris-HCl緩沖液溶解，過Q陰離子交換層析柱，紫外檢測儀于280nm波長處檢測，收集穿透峰；

第五步：將上述穿透液過SP-陽離子柱交換層析柱，用含0.1mol/L NaCl的pH8.0、20mmol/L Tris-HCl緩沖液洗脫，紫外檢測儀于280nm波長處檢測，收集洗脫峰得到谷糠過氧化物酶。