[發明專利]一種登革病毒NS1抗原檢測試紙條、試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201910373380.6
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110007095A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 童國權;楊標;金巍;劉中華;王國強
• 申請（專利權）人: 江蘇碩世生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 徐振興;姚姣陽

本發明公開了一種登革病毒NS1抗原檢測試紙條、試劑盒及其制備方法，涉及登革病毒檢測技術領域。本發明公開的登革病毒NS1抗原檢測試紙條，包括依次貼于聚氯乙烯底部上的樣品墊、包被了標記有膠體金的抗登革病毒NS1單克隆抗體的免疫結合墊、包被了抗登革病毒NS1單克隆抗體的檢測線T和羊抗鼠IgG多抗的質控線C的硝酸纖維素膜和吸水紙；該試紙條可通過檢測標記物的方法檢測待檢樣品中是否存在登革病毒NS1抗原；該試紙條和包括有該試紙條的檢測卡可特異快速地進行登革病毒早期感染的檢測與診斷，減低成本，快速檢測，有效滿足臨床使用的需要。

技術領域：

本發明屬于體外診斷技術領域，具體涉及生物檢測技術領域，特別涉及一種登革病毒NS1抗原檢測試劑盒的制備方法。

背景技術：

登革熱是由登革熱病毒引起的一種急性傳染病，以埃及伊蚊和白紋伊蚊為傳播媒介，具有傳播迅猛、發病率高、人群普遍易感、重癥類型死亡率高等特點，被認為是全球最受關注的傳染病。目前在非洲、美洲、東地中海、東南亞和西太平洋100多個國家呈地方性流行，東南亞和西太平洋地區受DV(登革病毒)影響更為嚴重。大約2.5億人生活在登革熱流行國家，感染DV后可發生登革熱、登革出血熱(DHF)或登革休克綜合征(DSS)。每年估計有5000萬以上的登革熱感染發生，其中50萬人因患登革熱需住院治療，感染者中約2.5％發生死亡。

在我國，登革熱具有典型的輸入性和突發性，在發生時常常表現為較大范圍、較嚴重的暴發流行等特點。按照《中華人民共和國傳染病防治法》的規定為乙類傳染病。近年來，登革熱在我國本地暴發流行區域主要集中在廣東、云南、浙江、廣西、福建省(自治區)等東南沿海和邊境省份，而輸入病例在我國多數省份有分布。2014年我國登革熱爆發時病例的發生數量超過45000例。

登革病毒有四個血清型，在一個地區往往存在不同血清型病毒的交替流行，這更增加了登革出血熱和登革休克綜合征發生的可能性。登革出血熱和登革休克綜合征的病死率較高，不僅嚴重影響人民的身體健康，增加醫療負擔，而且嚴重影響居民生活和旅游業的發展，進而影響當地的經濟發展，同時由于控制不當還會造成大量的殺蟲劑浪費，導致環境污染，嚴重影響人類和環境健康，也能誘發媒介生物抗藥性。

登革熱的檢測對象為媒介標本(伊蚊成蚊和幼蟲)、疑似和臨床診斷病例(按照登革熱診斷標準WS216-2008)。媒介標本檢測分為核酸檢測和病毒分離兩種方法。疑似和臨床診斷病例檢測，包括病原學檢測和血清學檢測。由于目前尚無特效的抗病毒治療藥物，主要采取支持及對癥治療措施。治療原則是早發現、早診斷、早治療、早防蚊隔離。

而目前，市面上缺乏針對登革病毒檢測的試劑盒。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種登革病毒NS1抗原檢測試紙條和包括該試紙條的檢測卡。該登革病毒NS1抗原檢測試紙條和檢測卡可特異快速地進行登革病毒早期感染的檢測與診斷，減低成本，檢測速度快。

本發明的另一目的在于提供上述登革病毒NS1抗原檢測試紙條和包括該試紙條的檢測卡的制備方法。該制備方法得到的登革病毒NS1抗原檢測試紙條和檢測卡應用簡便，結果準確，為下一步準確治療由登革病毒引起的疾病提供了依據，適于大規模推廣應用。

本發明的另一目的在于提供含有上述登革病毒NS1抗原檢測卡的試劑盒。該試劑盒可特異快速地進行登革病毒早期感染的檢測與診斷，減低成本，快速檢測，有效滿足臨床使用的需要。

為實現上述目的，本發明提供了一種登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法采用了如下的技術方案：

a.用氯化金溶液和檸檬酸三鈉溶液制備膠體金溶液；

b.碳酸鉀調節步驟a得到的膠體金溶液的pH至6.5-8.0，依次加入NS1 mAb5、牛血清白蛋白溶液，離心得到沉淀，重懸液重懸沉淀得到膠體金標記的NS1 mAb5溶液；