[發明專利]一種登革病毒NS1抗原檢測試紙條、試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201910373380.6
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110007095A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 童國權;楊標;金巍;劉中華;王國強
• 申請（專利權）人: 江蘇碩世生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 徐振興;姚姣陽

1.一種登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法,其特征在于,包括以下步驟：

a.用氯化金溶液和檸檬酸三鈉溶液制備膠體金溶液；

b.碳酸鉀調節步驟a得到的膠體金溶液的pH至6.5-8.0，依次加入抗登革病毒NS1單克隆抗體、牛血清白蛋白溶液，離心得到沉淀，重懸液重懸沉淀得到膠體金標記的抗登革病毒NS1單克隆抗體溶液；

c. 用結合墊處理液均勻噴涂在結合墊上進行預處理，預處理結束后用步驟b得到的抗登革病毒NS1單克隆抗體標記的膠體金溶液對結合墊噴金得到免疫結合墊,劃膜結束后將免疫結合墊置于室溫，濕度≤30%條件下干燥1小時；

d.用包被緩沖液稀釋抗登革病毒NS1單克隆抗體得到檢測線工作液；用包被緩沖液稀釋羊抗鼠IgG多抗得到質控線工作液；用檢測線工作液和質控線工作液分別在貼于聚氯乙烯底板的硝酸纖維素膜上劃線，劃膜結束后將膜置于37℃干燥箱中干燥24小時；

e.用樣品墊處理液均勻噴涂在樣品墊上進行預處理；

f.將樣品墊和免疫結合墊貼于劃膜的硝酸纖維素膜下方，將吸水紙貼于劃膜的硝酸纖維素膜的上方得到登革病毒NS1抗原檢測試紙條。

2.根據權利要求1所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：膠體金標記用的抗登革病毒NS1單克隆抗體為NS1 mAb5，硝酸纖維素膜包被用的抗登革病毒NS1單克隆抗體為NS1 mAb6。

3.根據權利要求1所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟a所述的具體制備步驟為稱取990g水于三角燒瓶中，加入10ml 濃度為2%的氯化金溶液，即溶液中氯化金的終濃度為0.02%，將燒瓶置于磁力攪拌器上加熱至沸騰，迅速加入13ml濃度為2%的檸檬酸三鈉溶液，待溶液變為紅棕色后繼續加熱沸騰5分鐘，靜置至恢復室溫，置于4℃保存待用。

4.根據權利要求1所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟b所述的具體步驟是將膠體金溶液中加入0.2M碳酸鉀，混勻調節pH至6.5-8.0，然后加入NS1mAb5，繼續攪拌30min，再加入2ml 10%牛血清白蛋白溶液，繼續攪拌30min，在4℃轉速為8000g的條件下離心30min得到沉淀，沉淀用1ml重懸液復溶。

5.根據權利要求1或3所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟b所述重懸液為0.01M磷酸鹽緩沖液，每100ml磷酸鹽緩沖液包含1g牛血清白蛋白和10g海藻糖、0.05% NaN₃，pH 7.0±0.1。

6.根據權利要求1所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟c所述的免疫結合墊采用玻璃纖維膜或聚酯纖維膜。

7.根據權利要求1所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟c所述結合墊處理液為硼酸-硼砂緩沖體系，每100ml結合墊處理液含0.9g 硼酸、0.6g四硼酸鈉、5g海藻糖、0.5g BSA、10mg 阻斷劑、0.2% Triton X-100、0.05% NaN₃，pH 8.6±0.1。

8.根據權利要求1所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟d中，所述的包被緩沖液為Tris緩沖體系，每100ml包被緩沖液含1.21g Tris、0.5g 氯化鈉、3g 蔗糖、0.05% NaN₃，pH 8.6±0.1。

9.根據權利要求1所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟d中，所述檢測線工作液濃度為1.0mg/mL；所述質控線工作液濃度為1.5mg/ml。

10.根據權利要求1所述的登革病毒NS1抗原檢測試紙條的制備方法，其特征在于：步驟e中所述樣品墊采用玻璃纖維膜或聚酯纖維膜。