[發明專利]一種檢測雙歧桿菌的培養基及快速檢測計數的方法

在審

• 申請號: 201910373212.7
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110055301A
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: 蔣曙光;薛亮;曹琥靚;張晨俍;陳昌經;陳李帆
• 申請（專利權）人: 上海源本食品質量檢驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種檢測雙歧桿菌的培養基及快速檢測計數的方法，涉及雙歧桿菌檢測技術領域，本發明所述的檢測雙歧桿菌的培養基包括基礎培養基、顯色底物5?溴?4?氯?3吲哚?α?D?半乳糖苷和/或5?溴?4?氯?3吲哚?β?D?半乳糖苷，雙歧桿菌培養過程中代謝產生α?半乳糖苷酶與顯色底物反應釋放吲哚，使培養基上出現藍色雙歧桿菌菌落或在雙歧桿菌菌落周圍產生藍暈，干擾菌無α?半乳糖苷酶不能顯藍色，且顯色底物對其他的干擾干擾菌具有抑制作用，通過添加表面活性劑，便于菌落快速生長；在檢測雙歧桿菌的培養基中添加抗生素，抑制其他干擾菌生長；采用本發明所述培養基對雙歧桿菌檢測計數，便于快速對雙歧桿菌菌落計數，結果顯著，檢測成本低、準確率高。

技術領域

本發明涉及雙歧桿菌檢測技術領域，更具體的說，它涉及一種檢測雙歧桿菌的培養基及快速檢測計數的方法。

背景技術

雙歧桿菌屬于雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)，是一種重要的有益微生物，正常情況下，人體內的腸道微生物會形成一個相對平衡的狀態，如果服用抗生素、放療、化療、情緒壓抑、身體衰弱、缺乏免疫力等情況下，會導致腸道菌群失去平衡，某些腸道微生物如產氣莢膜梭菌等在腸道中過度增殖并產生氨、胺類、硫化氫、糞臭素、吲哚、亞硝酸鹽、細菌毒素等有害物質，從而進一步影響機體的健康。

雙歧桿菌作為一種生理性有益菌，能抑制人體有害細菌的生長，抵抗病原菌的感染，合成人體需要的維生素，促進人體對礦物質的吸收，產生醋酸、丙酸、丁酸和乳酸等有機酸刺激腸道蠕動，促進排便，防止便秘以及抑制腸道腐敗作用、凈化腸道環境、分解致癌物質、刺激人體免疫系統，從而提高人體的抗病能力，對人體健康具有生物屏障、營養作用、抗腫瘤作用、免疫增強作用、改善胃腸道功能、抗衰老等多種重要的生理功能。

雙歧桿菌在治療腸道菌群失調相關疾病方面具有明顯的效果。包括在中國、美國和歐盟等大多數國家，已經批準雙歧桿菌可以作為藥物用于臨床上某些腸道疾病如腹瀉的治療。世界胃腸道病學組織(WGO)已經公布了一部關于益生菌和益生元的臨床應用指南(WGO,2008)[III]，指出雙歧桿菌能緩解腸道炎癥和腸易激綜合征癥狀，預防抗生素相關性腹瀉等。

市場上含有益生菌的產品越來越多，雙歧桿菌被廣泛應用于醫療、保健、食品等方面，雙歧桿菌制品中雙歧桿菌活菌的數量決定產品的品質，快速有效地檢測雙歧桿菌對于辨別產品中添加雙歧桿菌的數量具有重要的意義，其中分子生物學方法簡單操作容易，但其檢測的前期投入和后期消耗品費用十分昂貴，而酶聯免疫法存在假陽性過多的情況，目前對于雙歧桿菌的檢測，食品安全國家標準GB4789.34-2016中提出一種對于雙歧桿菌的檢測方法，使用雙歧桿菌培養基(BBL培養基)進行培養，不過只適用于食品中包含一個或多個不同的雙歧桿菌菌種的計數，乳酸桿菌也能夠在BBL培養基上生長。

對于同時存在雙歧桿菌、乳酸桿菌和嗜熱鏈球菌的檢測，食品安全國家標準GB4789.35-2016中提出一種對于雙歧桿菌、乳酸桿菌和嗜熱鏈球菌的檢測方法，先對樣品選擇2個～3個連續的適宜稀釋度,每個稀釋度吸取1mL樣品勻液于滅菌平皿內,每個稀釋度做兩個平皿。稀釋液移入平皿后,將冷卻至48℃的莫匹羅星鋰鹽和半胱氨酸鹽酸鹽改良的MRS培養基傾注入平皿約15mL,轉動平皿使混合均勻。36±1℃厭氧培養72h±2h,培養后計數平板上的所有菌落數為雙歧桿菌的菌落數，在實際操作過程中發現，乳桿菌也可以在該改良培養基上生長，使得菌落計數不準確。