[發明專利]一種檢測雙歧桿菌的培養基及快速檢測計數的方法

在審

• 申請號: 201910373212.7
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110055301A
• 公開（公告）日: 2019-07-26
• 發明（設計）人: 蔣曙光;薛亮;曹琥靚;張晨俍;陳昌經;陳李帆
• 申請（專利權）人: 上海源本食品質量檢驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;C12Q1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測雙歧桿菌的培養基，其特征在于，包括基礎培養基、顯色底物，所述顯色底物為5-溴-4-氯-3吲哚-α-D-半乳糖苷和/或5-溴-4-氯-3吲哚-β-D-半乳糖苷，所述基礎培養基包括碳源、氮源、無機鹽、生長因子、水。

2.根據權利要求1所述的一種檢測雙歧桿菌的培養基，其特征在于，所述顯色底物用量為20-100mg/L。

3.根據權利要求1所述的一種檢測雙歧桿菌的培養基，其特征在于，所述碳源的用量為0-40g/L，所述碳源由葡萄糖提供；所述氮源的用量為5-25g/L，所述氮源由蛋白胨和/或酪蛋白提供；所述生長因子由牛肉浸粉和酵母浸粉提供，所述牛肉浸粉的用量為2-10g/L，所述酵母浸粉的用量為2-10g/L；所述無機鹽包括微量元素供給物和緩沖劑，所述微量元素供給物包括硫酸錳、硫酸鎂、乙酸鈉、磷酸氫二鉀、檸檬酸氫二銨中的一種或多種，緩沖劑包括磷酸氫二鉀和/或檸檬酸氫二銨，所述磷酸氫二鉀的用量為1-6g/L、所述檸檬酸氫二銨的用量為1-6g/L、所述乙酸鈉的用量為1-6g/L、所述硫酸鎂的用量為0-0.5g/L、所述硫酸錳的用量為0.02-0.10g/L、加入瓊脂用于制備固體或半固體培養基，所述瓊脂用量為8-20g/L、余量為蒸餾水。

4.根據權利要求1所述的一種檢測雙歧桿菌的培養基，其特征在于，所述檢測雙歧桿菌的培養基中還包括有表面活性劑，所述表面活性劑包括有吐溫-80、巰基乙醇、二硫蘇糖醇中的一種或多種。

5.根據權利要求1所述的一種檢測雙歧桿菌的培養基，其特征在于，控制雙歧桿菌的培養基的pH=5-7。

6.根據權利要求1所述的一種檢測雙歧桿菌的培養基，其特征在于，所述培養基還包括有至少以下一組抗生素：

組一：莫匹羅星、多粘菌素B；

組二：氯化鋰、硫酸新霉素、硫酸巴龍霉素；

組三：氯化鋰、丙酸鈉和雙氯青霉素。

7.一種雙歧桿菌快速檢測計數的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟A、配制權利要求書1-6中任意一種檢測雙歧桿菌的培養基；

步驟B、對待測物進行取樣后得到待測樣品；

步驟C、對待測樣品進行梯度稀釋后得到梯度稀釋待測樣品；

步驟D、選擇至少2個連續稀釋度的梯度稀釋待測樣品接種于步驟A中的檢測雙歧桿菌的培養基上；

步驟E、將接種完畢的檢測雙歧桿菌的培養基倒置于30-41℃的厭氧培養箱或厭氧產氣盒內培養36-72h；

步驟F、從厭氧培養箱或厭氧產氣盒內取出，選取每皿30-300CFU之間的平板計數并計算雙歧桿菌的含量。

8.根據權利要求7所述的一種雙歧桿菌快速檢測計數的方法，其特征在于，所述步驟A具體包括：

步驟a.用電子天平稱取蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉、葡萄糖、磷酸氫二鉀、檸檬酸氫二銨、乙酸鈉、硫酸鎂、硫酸錳；

步驟b.直接加入蒸餾水，稍微加熱使其完全溶解；

步驟c.再加入顯色底物、表面活性劑和抗生素；

步驟d.25℃下混勻后調節pH=6.5±0.2；

步驟e.最后加入瓊脂粉，煮沸使其完全溶解；

步驟f.冷卻至50℃，在超凈工作臺上倒入無菌平板內，制成顯色平板；

步驟g.放置于50±1℃恒溫水浴箱中保溫。

9.根據權利要求7所述的一種雙歧桿菌快速檢測計數的方法，其特征在于，所述步驟C具體包括：

步驟a1.將充分混勻的樣品取25g放入225mL滅菌生理鹽水中稀釋，制成1:10的梯度稀釋待測樣品；

步驟b1.用1mL滅菌吸管吸取1:10的梯度稀釋待測樣品1mL，沿管壁注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內，充分混勻，制成1:100的梯度稀釋待測樣品；

步驟c1.另取1mL滅菌吸管，按步驟b1操作順序，制作10倍遞增稀釋待測樣品，每遞增一次換用一支1mL滅菌吸管，制成若干倍數的均勻稀釋液。

10.根據權利要求7所述的一種雙歧桿菌快速檢測計數的方法，其特征在于，所述步驟D具體包括：

步驟a2.將1mL菌種勻液加入無菌平皿內；

步驟b2.及時將15-20mL冷卻至46-50℃的檢測雙歧桿菌的培養基傾注平皿；

步驟c2.轉動平皿使其混合均勻。