[發(fā)明專利]一種加壓素的精制方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910371792.6
• 申請(qǐng)日: 2019-05-06
• 公開（公告）號(hào): CN109929010B
• 公開（公告）日: 2021-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 江錫銘;朱鑫磊;黃龍;丁金國;黃臻輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海上藥第一生化藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C07K7/16
• 分類號(hào): C07K7/16;C07K1/20
• 代理公司: 上海弼興律師事務(wù)所 31283
• 代理人: 薛琦;鄒玲

本發(fā)明公開了一種加壓素的精制方法，該精制方法包括下述步驟：采用高效液相反相色譜法將加壓素粗品溶液依次進(jìn)行反相富集、反相轉(zhuǎn)鹽、反相純化，即可；加壓素粗品溶液為固相合成的還原型加壓素粗品溶液經(jīng)氧化后而得；高效液相反相色譜法的填料為超耐水填料。本發(fā)明運(yùn)用了在線反相富集、反相轉(zhuǎn)鹽、反相純化一步法制得多肽純品，加壓素粗品中雜質(zhì)的去除率較高，得到加壓素純品的純度更高，優(yōu)化了生產(chǎn)工藝，其中，柱平衡、上樣富集和轉(zhuǎn)鹽階段的流動(dòng)相為水溶液，環(huán)保無污染，流出的廢液可直接進(jìn)行污水處理并回收利用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種加壓素的精制方法。

背景技術(shù)

加壓素是由九個(gè)氨基酸殘基組成的合成多肽，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為加壓素的理論分子量1084.24。屬于神經(jīng)垂體激素，又叫血管升壓素或后葉加壓素，它有兩種受體V1和V2。V1主要分布在血管平滑肌細(xì)胞膜上，通過受體-G蛋白-第二信使途徑發(fā)揮作用，使血管收縮，血壓升高。V2在腎臟遠(yuǎn)端小管和集合管上皮細(xì)胞，生理劑量可以促進(jìn)腎臟遠(yuǎn)端小管和集合管對(duì)水的重吸收，發(fā)揮抗利尿作用。

目前已上市多肽藥物常見的純化方法大都采用了制備型高效液相色譜法，該法是獲得高純度多肽目標(biāo)分子的最有效的方法。一般多肽藥物純化制備工藝設(shè)計(jì)是先中低壓色譜富集目標(biāo)多肽，然后高壓色譜精制，但是考慮到目標(biāo)多肽加壓素分子量約1kDa，無合適的分子篩凝膠柱(其上樣量小，流速低，處理量小，比較適合分子量大于10kDa蛋白的脫鹽)或超濾膜選擇。而且中低壓色譜中常用的分離方法有分子篩色譜法、離子交換色譜法和疏水相互作用色譜法，這些色譜方法中用到的填料的粒徑通常從幾十微米到幾百微米不等，空隙尺寸多為幾百納米不等，無法得到高純度的目標(biāo)多肽。采用固相合成+稀釋環(huán)化得到的加壓素粗品溶液濃度均比較稀，采用一般的反相色譜柱進(jìn)行純化，僅上樣的過程中就產(chǎn)生大量的有機(jī)廢液，危廢的處理費(fèi)用很高。現(xiàn)在還缺乏一種有效的制備多肽鹽原料藥的方法，因此仍然迫切需要開發(fā)新的適合純化低濃度多肽及鹽的經(jīng)濟(jì)有效的工藝。

中國專利文獻(xiàn)CN106518975A公開了一種加壓素的制備方法。該制備方法包括下述步驟：采用高效液相反相色譜法將加壓素前體粗品溶液依次進(jìn)行反相環(huán)化、反相純化、反相脫鹽，即可；高效液相反相色譜法的填料為苯乙烯-二乙烯基苯共聚物；所述的加壓素前體粗品為含兩游離巰基的加壓素前體粗品。該專利的制備工藝中采用還原型的加壓素前體粗品為起始原料，粗品中雜質(zhì)的去除率較低為14.3％，且流動(dòng)相中使用NaOH作為堿性物質(zhì)，對(duì)pH的控制不利，可能對(duì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性造成影響。另外，該方法在色譜柱上進(jìn)行環(huán)化時(shí)需大量含有機(jī)溶劑的流動(dòng)相，在純化和轉(zhuǎn)鹽步驟中也產(chǎn)生了大量的有機(jī)危廢液，后續(xù)廢液的處理成本較大且難以回收利用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于為了克服現(xiàn)有技術(shù)中精制加壓素時(shí)，加壓素粗品溶液中雜質(zhì)的去除率較低，且產(chǎn)生的有機(jī)危廢液量大，造成的廢液處理成本大，不經(jīng)濟(jì)的缺陷，而提供了一種加壓素的精制方法。本發(fā)明的精制加壓素的方法在純化目標(biāo)產(chǎn)物的過程中產(chǎn)生的廢液大部分為廢水可經(jīng)污水處理可直接回用，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，加壓素粗品中雜質(zhì)的去除率更高，得到加壓素純品的純度更高。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題的：

本發(fā)明提供了一種加壓素的精制方法，其包括下述步驟：采用高效液相反相色譜法將加壓素粗品溶液依次進(jìn)行反相富集、反相轉(zhuǎn)鹽、反相純化，即可；所述的高效液相反相色譜法的填料為超耐水填料；

所述的反相富集、反相轉(zhuǎn)鹽、反相純化均是在一步的反相洗脫過程中完成，所述的反相富集、反相轉(zhuǎn)鹽、反相純化的條件如下：

其中流動(dòng)相A為體積百分比為0.005～0.1％的乙酸/水，流動(dòng)相B為體積百分比為0.005～0.1％的乙酸/乙腈，樣品C1為所述的加壓素粗品溶液，流動(dòng)相C2為5～50mM NH₄Ac-NH₄OH水溶液，所述的流動(dòng)相C2的pH為7.0～9.0，洗脫液的流速為80～100ml/min；