[發明專利]一種含有不穩定結構域的CAR-T細胞及其制備方法和調節CAR-T細胞功能方法

在審

• 申請號: 201910371296.0
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110079504A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發明（設計）人: 張文;孫嬌;劉江;唐東起
• 申請（專利權）人: 山東大學第二醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/62;C12N15/867
• 代理公司: 山東濟南齊魯科技專利事務所有限公司 37108
• 代理人: 張娟

1.一種含有不穩定結構域的CAR-T細胞，其特征在于：在CAR-T細胞中含有不穩定結構域的編碼基因；并且去除終止密碼子的CAR基因的3’端與不穩定結構域的編碼基因直接連接構成融合基因，并在CAR-T細胞中表達上述融合基因編碼的融合蛋白，該融合蛋白位于細胞膜上。

2.根據權利要求1所述的一種含有不穩定結構域的CAR-T細胞，其特征在于：所述的不穩定結構域為二氫葉酸還原酶DHFR的不穩定結構域、FKBP12蛋白的不穩定結構域或基于雌激素受體配體結合結構域發展的不穩定結構域ERLBP。

3.權利要求1所述的含有不穩定結構域的CAR-T細胞的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

①將不穩定結構域的編碼基因與CAR基因末端連接，構建融合基因；具體的，將不穩定結構域的編碼基因置于CAR基因的3’端，連接構成融合基因；

②將步驟①所得融合基因克隆插入慢病毒質粒；

③包裝病毒，制備攜帶融合基因的慢病毒；

④用步驟③所得慢病毒感染T細胞并擴增。

4.調節權利要求1所述的含有不穩定結構域的CAR-T細胞功能的方法，其特征在于：加入不穩定結構域對應的小分子化合物。

5.根據權利要求4所述的調節含有不穩定結構域的CAR-T細胞功能的方法，其特征在于：當所述不穩定結構域為二氫葉酸還原酶DHFR的不穩定結構域，對應小分子化合物為甲氧芐啶TMP；當所述不穩定結構域為FKBP12蛋白的不穩定結構域，對應小分子化合物為Shied-1；當所述不穩定結構域為基于雌激素受體配體結合結構域發展的不穩定結構域ERLBP，對應小分子化合物為4-羥基他莫昔芬。