[發明專利]一種快速加熱輔助下的固相合成多肽的方法

在審

• 申請號: 201910370743.0
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110156870A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 徐安;蔡倩;白雪皎;張潔;秦仲錚;叢楠楠;任曉東
• 申請（專利權）人: 天津中科生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/30
• 分類號: C07K1/30;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;姚亮

本發明提供了一種快速加熱輔助下的固相合成多肽的方法。本發明的方法包括：以Wang Resin作為起始樹脂，以Fmoc氨基保護的氨基酸溶液作為中間原料，通過縮合反應合成多肽；其中，縮合反應溫度控制為70℃～100℃，縮合反應時間為30秒～120秒。本發明的方法可提高反應速率，縮短反應時間，提高了產物的純度，最終降低了多肽的生產成本。該方法對常溫難以合成的多肽具有良好的效果。

技術領域

本發明是關于一種固相合成多肽的方法，具體地說，是關于一種快速加熱輔助下的固相合成多肽的方法，屬有機化學和藥物化學領域。

背景技術

多肽的固相合成一般以樹脂為起始原料，逐個連接氨基酸得到多肽粗品，為了防止副反應的發生，參加反應的氨基酸的側鏈都是被保護的。而反應物的羧基端是游離的，并且在反應之前必須活化。現階段本領域多采用固相合成法，其優點主要表現在最初的反應物和產物都是連接在固相載體上，因此可以在一個反應容器中進行所有的反應，便于自動化操作，加入過量的反應物可以獲得高產率的產物，同時產物很容易分離，工藝簡單，是化學合成多肽的首選方法。

目前，多肽的固相合成中存在的主要問題，一是由于固液之間的傳質問題而使得反應速度較慢，每個氨基酸的連接時間在兩個小時或以上，肽制備工藝時間長；二是由于氨基酸過量倍數高而增加了肽合成成本。

發明內容

本發明的主要目的在于針對現有的固相合成多肽的工藝技術進行改進，提供一種固相快速加熱合成多肽的方法，縮短反應時間，減少氨基酸的過量倍數，提高產物的純度，降低多肽的生產成本。

為實現上述目的，本發明提供了一種固相合成多肽的方法，該方法包括：

以Wang Resin作為起始樹脂，以Fmoc氨基保護的氨基酸溶液作為中間原料，快速加熱通過縮合反應合成多肽；

其中，縮合反應溫度控制為70℃～100℃，縮合反應時間為30秒～120秒。

根據本發明的具體實施方案，本發明的固相合成多肽的方法包括：

以Wang Resin作為起始樹脂，在溶劑DMF作用下溶脹；加入加熱后的脫保護試劑，得到脫保護后的樹脂，并進行加熱沖洗；

以Fmoc氨基保護的氨基酸溶液作為中間原料，在DMF溶劑中加入活化劑對羧基預活化；

將活化后的Fmoc保護的第一氨基酸溶液加熱，與脫保護后的樹脂產物混合，進行縮合反應，得到帶有產物的固相樹脂；對帶有產物的固相樹脂進行加熱沖洗；

按照目標多肽氨基酸序列從C端到N端的順序，依序進行第二及后續氨基酸的縮合，得到多肽固相樹脂；

多肽固相樹脂通過切割試劑進行切割反應，然后采用冰乙醚沉淀，得到多肽。

根據本發明的具體實施方案，本發明的固相合成多肽的方法中，所述起始樹脂的取代度為0.3～0.5mmol/g。

根據本發明的具體實施方案，本發明的固相合成多肽的方法中，所述起始樹脂在溶劑DMF作用下溶脹時，溶劑的使用量為起始樹脂全部盡在溶劑中的量，溶脹0.5～1小時。

根據本發明的具體實施方案，本發明的固相合成多肽的方法中，所述脫保護試劑選自Fmoc的脫保護試劑，Fmoc的脫保護試劑選用體積溶度為15％-25％哌啶/DMF溶液，脫保護試劑的使用量為樹脂體積的2～5倍。

根據本發明的具體實施方案，本發明的固相合成多肽的方法中，脫保護反應溫度為70℃～100℃，脫保護反應時間為30秒～120秒。

根據本發明的具體實施方案，本發明的固相合成多肽的方法中，對羧基預活化過程中，所述活化劑選自脲正離子型縮合劑HATU，活化劑的使用量與氨基酸投料量的摩爾數相同。