[發明專利]一種快速加熱輔助下的固相合成多肽的方法

在審

• 申請號: 201910370743.0
• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110156870A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發明（設計）人: 徐安;蔡倩;白雪皎;張潔;秦仲錚;叢楠楠;任曉東
• 申請（專利權）人: 天津中科生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/30
• 分類號: C07K1/30;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 韓蕾;姚亮

1.一種固相合成多肽的方法，該方法包括：

以Wang Resin作為起始樹脂，以Fmoc氨基保護的氨基酸溶液作為中間原料，通過縮合反應合成多肽；

其中，縮合反應溫度控制為70℃～100℃，縮合反應時間為30秒～120秒。

2.根據權利要求1所述方法，該方法包括：

以Wang Resin作為起始樹脂，在溶劑DMF作用下溶脹；加入加熱后的脫保護試劑，得到脫保護后的樹脂，并進行加熱沖洗；

以Fmoc氨基保護的氨基酸溶液作為中間原料，在DMF溶劑中加入活化劑對羧基預活化；

將活化后的Fmoc保護的第一氨基酸溶液加熱，與脫保護后的樹脂產物混合，進行縮合反應，得到帶有產物的固相樹脂；對帶有產物的固相樹脂進行加熱沖洗；

按照目標多肽氨基酸序列從C端到N端的順序，依序進行第二及后續氨基酸的縮合，得到多肽固相樹脂；

多肽固相樹脂通過切割試劑進行切割反應，然后采用冰乙醚沉淀，得到多肽。

3.根據權利要求2所述的方法，其中，所述起始樹脂的取代度為0.3～0.5mmol/g。

4.根據權利要求2所述的方法，其中，所述起始樹脂在溶劑DMF作用下溶脹時，溶劑的使用量為起始樹脂全部盡在溶劑中的量，溶脹0.5～1小時。

5.根據權利要求2所述的方法，其中，所述脫保護試劑選自Fmoc的脫保護試劑，Fmoc的脫保護試劑選用體積溶度為15％-25％哌啶/DMF溶液，脫保護試劑的使用量為樹脂體積的2～5倍。

6.根據權利要求5所述的方法，其中，脫保護反應溫度為70℃～100℃，脫保護反應時間為30秒～120秒。

7.根據權利要求2所述的方法，其中，對羧基預活化過程中，所述活化劑選自脲正離子型縮合劑HATU，活化劑的使用量與氨基酸投料量的摩爾數相同。

8.根據權利要求2所述的方法，其中，對羧基預活化過程中，中間原料在70～100℃的加熱模塊中加熱5～15秒，DMF溶劑的使用量為使溶質溶解的量。

9.根據權利要求8所述的方法，其中，DMF溶劑的使用量為溶質與溶劑的質量體積比為100mg:2～5ml。

10.根據權利要求2所述的方法，其中，縮合反應步驟中，保護氨基的投料量與脫保護后的樹脂產物的混合的摩爾比為4～10:1。