[發(fā)明專利]一種具有增強免疫活性的青蛤多糖及其制備方法和應用

有效

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• 申請日: 2019-05-06
• 公開（公告）號: CN110128560B
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設計）人: 宋爽;曹春陽;宮悅;閆春紅;艾春青;溫成榮;付穎寰;董秀萍;祁立波
• 申請（專利權）人: 大連工業(yè)大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61P37/04;A23L33/125
• 代理公司: 大連格智知識產(chǎn)權代理有限公司 21238
• 代理人: 劉琦

本發(fā)明公開了一種具有增強免疫活性的青蛤多糖，所述青蛤多糖的主鏈由→4)?α?D?Glcp(1→構成，所述青蛤多糖結構中→4)Glc(1→和→4,6)Glc(1→的比例為6.8:1，分子量為380KDa，單糖組成為甘露糖:葡萄糖＝1:35；以青蛤為原料，經(jīng)過包括脫脂、酶解、絡合沉淀、醇沉除雜和DEAE?纖維素柱純化等步驟，制得青蛤多糖；本發(fā)明所得青蛤多糖能促進RAW 264.7細胞生成NO，在所述青蛤多糖1～10μg/mL范圍內(nèi)能極顯著提高RAW 264.7細胞NO分泌能力且與劑量呈正相關；所述青蛤多糖可作為開發(fā)免疫調(diào)節(jié)藥物及功能性食品的重要來源，為海洋貝類的高值轉化提供理論依據(jù)和實踐指導。

技術領域

本發(fā)明涉及活性多糖技術領域，具體涉及一種具有增強免疫活性的青蛤多糖、提取方法及其在增強免疫的功能食品或藥品中的應用。

背景技術

青蛤(Cyclina sinensis)，又稱黑蛤、鐵蛤、圓蛤、蛤蜊、牛眼蛤，廣泛分布于遼寧、河北、山東、江蘇、浙江、福建、廣東、廣西以及海南島等地，是我國南北沿海習見和主要的食用雙殼貝類，在我國灘涂貝類養(yǎng)殖中占有重要的經(jīng)濟地位。青蛤不但具有食用價值，而且還具有藥用價值，是非常重要的海洋藥物；《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等均將青蛤作為一種常用藥物收錄其中。青蛤具有很高的營養(yǎng)及藥用價值，故青蛤資源的開發(fā)利用一直受到人們的重視。

現(xiàn)代醫(yī)學、分子生物學及細胞生物學的發(fā)展，使人們認識到免疫系統(tǒng)紊亂不僅會產(chǎn)生諸多疾病，且與人體衰老和中老年人多發(fā)病如腫瘤、高血壓、糖尿病甚至精神病發(fā)生均有密切關系。因此，尋找高效的免疫調(diào)節(jié)劑已成為當代新藥或功能保健品的發(fā)展方向之一。諸多的免疫調(diào)節(jié)劑中，多糖類最為引人注目，多糖具有突出的免疫調(diào)節(jié)活性，且對機體正常細胞和組織基本沒有毒性，可作為開發(fā)免疫調(diào)節(jié)藥物及功能性食品的重要來源。但目前具有免疫活性的多糖來源極其有限，因此，亟需開發(fā)新的具有高免疫活性的多糖解燃眉之急。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種青蛤多糖，以青蛤貝肉為原料，通過脫脂、雙酶法酶解、季銨鹽絡合沉淀、純化等過程制備得到一種多糖成分。主鏈結構為→4)-α-D-Glcp-(1→，1μg/mL的劑量即可增強免疫活性。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種具有增強免疫活性的青蛤多糖，所述青蛤多糖的主鏈由→4)-α-D-Glcp(1→構成，所述青蛤多糖結構中→4)Glc(1→和→4,6)Glc(1→的比例為6.8:1，分子量為380KDa，單糖組成為甘露糖:葡萄糖＝1:35。

所述具有增強免疫活性的青蛤多糖的制備方法，包括步驟：

S1、制備脫脂粉：取青蛤肉凍干后破碎成青蛤粉，使用丙酮對所述青蛤粉進行脫脂，干燥得脫脂粉；

S2、酶解：取步驟S1所述脫脂粉，每克脫脂粉中加入2～5mL 0.05mol/L的半胱氨酸-EDTA二鈉溶液和15～25mL 0.05mol/L、pH＝8的K₂HPO₄緩沖液，再加入胰蛋白酶干粉，37℃、100～150rpm振蕩酶解2～5h，得混合溶液1；向所述混合液1中加入木瓜蛋白酶干粉，65℃、100～150rpm振蕩酶解1～5h得混合液2；

其中，所述胰蛋白酶的添加量為每克脫脂粉加入1250～7500U的胰蛋白酶；所述木瓜蛋白酶的添加量為每克脫脂粉加入10000～60000U的木瓜蛋白酶；

S3、滅酶：將步驟S2所述混合液2加熱，使酶失活，冷卻到室溫，離心取上清液；

S4、絡合沉淀：向步驟S3所述上清液中加入質(zhì)量百分濃度(m/m)0.1％～15％的氯化十六烷基吡啶溶液(CPC)，室溫放置2～48h，離心取沉淀1；

其中，所述質(zhì)量濃度(m/m)0.1～15％氯化十六烷基吡啶溶液的添加量為：以步驟S2所述脫脂粉的添加量為參照，每克脫脂粉對應添加1～2mL質(zhì)量濃度(m/m)0.1～15％氯化十六烷基吡啶溶液；