[發明專利]一種24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201910367609.5
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN110058028B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 歐賽英;涂策;李大軍
• 申請（專利權）人: 蘇州長光華醫生物醫學工程有限公司
• 主分類號: G01N33/82
• 分類號: G01N33/82;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 蘇州知途知識產權代理事務所(普通合伙) 32299
• 代理人: 馬剛強;時萌萌

本發明涉及一種24,25?雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒及其應用，試劑盒包括：全氟辛酸工作液、生物素工作液、抗體工作液、鏈霉親和素包被的磁顆粒試劑、24,25?(OH)2?VitD校準品溶液及化學發光底物液，所述抗體工作液包含化學發光標記物標記的抗24,25?(OH)2?VitD免疫單抗、未標記的抗25?OH?VitD免疫單抗、未標記的抗1,25?(OH)2?VitD免疫單抗、未標記的抗3?epi?25OH?VitD免疫單抗。本發明還采用上述試劑盒對24,25?(OH)2?VitD進行化學發光免疫檢測，結果準確。

技術領域

本發明涉及一種24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒及其應用，屬于體外檢測技術領域。

背景技術

維生素D在人體中主要以膽鈣化醇(D3)和麥角鈣化醇(D2)兩種形式存在，其中，膽鈣化醇(D3)來源于陽光和肉制品，麥角鈣化醇(D2)來源于膳食植物源。維生素D內分泌系統在人體中起著重要的生物學功能，維生素D經血液循環進入肝臟，在25-羥化酶CYP2R1的作用下轉化為25-羥基維生素D(25-OH-VitD，包括25-OH-VitD2和25-OH-VitD3)，繼而在腎臟中被24-羥化酶CYP24A1催化生成24,25-雙羥基維生素D(24,25-(OH)2-VitD)，25-OH-VitD還可在體內代謝為具有生物學活性的1,25-(OH)2-VitD及3-epi-25OH-VitD。

研究表明，24,25-(OH)2-VitD與25-OH-VitD呈依賴關系，25-OH-VitD與24,25-(OH)2-VitD的濃度比值在血清25-OH-VitD濃度低于20ng/ml時顯著增加，而在血清25-OH-VitD濃度高時此比值下降，這可能是由于血液循環中25-OH-VitD下降導致CYP24A1下調，以促進分解代謝產物1,25-(OH)2-VitD的產生；而在25-OH-VitD高濃度個體中，則傾向于產生24,25-(OH)2-VitD以降低1,25-(OH)2-VitD的產量，起到預防毒性的作用。因此，血清24,25-(OH)2-VitD濃度的測定有助于識別CYP24A1功能缺失突變的患者，且血清中25-OH-VitD與24,25-(OH)2-VitD濃度的比值可以作為維生素D分解代謝狀態的指標，尤其對于腎鈣化或腎結石患者，如果檢測到25-OH-VitD與24,25-(OH)2-VitD的濃度比值升高，說明要限制或避免補充維生素D，以防止高鈣血癥和進一步的結石形成。

目前，對于25-OH-VitD的檢測已經應用得比較成熟，常使用的檢測方法有競爭法或蛋白結合免疫法及色譜法，其中，液相色譜串聯質譜(LC-MS/MS)法為檢測的標準方法，然而此方法專業水平要求極高、費時費力，而免疫方法相對簡單、通量高，目前國內外各大體外診斷試劑廠家提供各種25-OH-VitD免疫檢測試劑，包括從樣本準備階段(如從VDBP中完全連續地釋放25-OH-VitD)、結合系統(單抗、多抗還是VDBP)、檢測系統(酶、熒光物質、發光物質等)、信號系統(如光吸收、化學發光、放射標記等)等各個階段所用到的各種試劑，目前國際標準品已建立起來，為消除方法間差異打下基礎。然而，對于24,25-(OH)2-VitD的檢測，國內外僅有使用LC-MS/MS法測定24,25-(OH)2-VitD的報道，LC-MS/MS操作復雜費時而且需要高端精密的儀器，但是目前尚無免疫學方法可以準確檢測24,25-(OH)2-VitD。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：為解決現有技術中尚無免疫學方法可以準確檢測24,25-(OH)2-VitD的技術問題，提供一種24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒及其應用。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：