[發明專利]一種24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201910367609.5
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN110058028B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 歐賽英;涂策;李大軍
• 申請（專利權）人: 蘇州長光華醫生物醫學工程有限公司
• 主分類號: G01N33/82
• 分類號: G01N33/82;G01N33/531;G01N33/543
• 代理公司: 蘇州知途知識產權代理事務所(普通合伙) 32299
• 代理人: 馬剛強;時萌萌

1.一種24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括：全氟辛酸工作液、生物素工作液、抗體工作液、鏈霉親和素包被的磁顆粒試劑、24,25-(OH)2-VitD校準品溶液及化學發光底物液，所述抗體工作液包含化學發光標記物標記的抗24,25-(OH)2-VitD免疫單抗、未標記的抗25-OH-VitD免疫單抗、未標記的抗1,25-(OH)2-VitD免疫單抗和未標記的抗3-epi-25OH-VitD免疫單抗；

所述全氟辛酸工作液中含有5-15體積％的乙二醇，所述全氟辛酸工作液中全氟辛酸的濃度為100ng/mL；

所述抗體工作液中含有蛋白、多糖及多元醇，所述蛋白為白蛋白和/或酪蛋白，濃度為0.5-2mg/mL；所述多糖為果糖和/或蔗糖，濃度為3-5mg/mL；所述多元醇為丙三醇和/或乙二醇，濃度為3-5mg/mL。

2.根據權利要求1所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述抗24,25-(OH)2-VitD免疫單抗、抗25-OH-VitD免疫單抗、抗1,25-(OH)2-VitD免疫單抗、抗3-epi-25OH-VitD免疫單抗均為綿羊單抗。

3.根據權利要求1或2所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述抗體工作液中含有異噬性抗體阻斷劑HBR。

4.根據權利要求1或2所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述抗體工作液由PBS或CBS緩沖液配制而成。

5.根據權利要求1或2所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述化學發光標記物標記的抗24,25-(OH)2-VitD免疫單抗的制備方法為：將抗24,25-(OH)2-VitD免疫單抗與化學發光標記物在PBS或CBS緩沖液中按1:10～20的摩爾比反應0.5-1.5小時，透析去除未交聯的小分子，得到化學發光標記物標記的抗24,25-(OH)2-VitD免疫單抗。

6.根據權利要求1或2所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，全氟辛酸工作液由PBS或CBS緩沖液配制而成。

7.根據權利要求1或2所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述24,25-(OH)2-VitD校準品溶液由去類固醇激素血清配制而成。

8.根據權利要求1或2所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述化學發光標記物選自魯米諾或其衍生物、異魯米諾或其衍生物、吖啶酯或吖啶磺酰胺。

9.根據權利要求1或2所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述化學發光底物液包括化學發光激發液1和化學發光激發液2，所述化學發光激發液1含無機酸和過氧化物，所述化學發光激發液2含氫氧化物。

10.一種權利要求1-9任一項所述的24,25-雙羥基維生素D免疫檢測試劑盒的應用，其特征在于，按照以下步驟使用：

將待測樣本與全氟辛酸工作液加熱反應，之后加入生物素工作液和抗體工作液加熱孵育，再加入鏈霉親和素包被的磁顆粒試劑加熱孵育，形成磁性復合物懸浮液；

將磁性復合物懸浮液置于磁場內，洗滌所述磁性復合物；

向洗滌后的磁性復合物中注入化學發光底物液，檢測其化學發光光子強度。