[發明專利]源自Nocardia farcinica的L-泛解酸內酯脫氫酶及其應用有效
| 申請號： | 201910366852.5 | 申請日： | 2019-05-05 |
| 公開（公告）號： | CN110527671B | 公開（公告）日： | 2021-03-23 |
| 發明（設計）人： | 應向賢;汪釗;趙嫚;程先鋒;林行;殷杭華;張連春;毛王偉;陳梁;白彥兵;金文究;沈漢軍;汪軍;蔡劍敏 | 申請（專利權）人： | 杭州鑫富科技有限公司;浙江工業大學 |
| 主分類號： | C12N9/04 | 分類號： | C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人： | 潘穎;趙青朵 |
| 地址： | 311300 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 源自 nocardia farcinica 泛解酸 內酯 脫氫酶 及其 應用 | ||
1.L-泛解酸內酯脫氫酶在催化L-泛解酸內酯生成D-泛解酸內酯中的應用，其特征在于，所述L-泛解酸內酯脫氫酶來源于
2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，編碼權利要求1所述L-泛解酸內酯脫氫酶的多核苷酸的核苷酸序列為SEQ ID No:1所示的核苷酸序列。
3.一種多酶重組細胞，其特征在于，所述多酶重組細胞誘導產生權利要求1所述L-泛解酸內酯脫氫酶和D-酮基泛解酸內酯還原酶；
所述L-泛解酸內酯脫氫酶來源于
所述D-酮基泛解酸內酯還原酶來源于釀酒酵母，其氨基酸序列如SEQ ID No:4所示；
所述重組細胞為非植物品種。
4.如權利要求3所述的多酶重組細胞，其特征在于，編碼所述D-酮基泛解酸內酯還原酶的多核苷酸序列為SEQ ID No:3所示的核苷酸序列。
5.如權利要求3所述的多酶重組細胞，其特征在于，所述多酶重組細胞還誘導產生葡萄糖脫氫酶。
6.如權利要求5所述的多酶重組細胞，其特征在于，所述葡萄糖脫氫酶來源于微小桿菌，其氨基酸序列如SEQ ID No:6所示。
7.如權利要求6所述的多酶重組細胞，其特征在于，編碼所述葡萄糖脫氫酶的多核苷酸序列為SEQ ID No:5所示的核苷酸序列。
8.多酶重組細胞的構建方法，其特征在于，包括：
步驟一，將權利要求2所述的多核苷酸插入第一載體，得到第一重組載體；將權利要求4所述的多核苷酸插入第二載體，得到第二重組載體；以及
步驟二，將所述第一重組載體和第二重組載體導入宿主細胞，得到多酶重組細胞。
9.如權利要求8所述的構建方法，其特征在于，所述步驟一中，將權利要求4和權利要求7中所述的多核苷酸分別插入第二載體，得到第二重組載體。
10.如權利要求8或9所述的構建方法，其特征在于，所述第一載體為pET-28b，所述第二載體為pACYCDuet-1，所述宿主細胞為
11.一種制備D-泛解酸內酯的方法，其特征在于，利用多酶重組細胞誘導產生的L-泛解酸內酯脫氫酶和D-酮基泛解酸內酯還原酶催化L-泛解酸內酯生成D-泛解酸內酯；
所述L-泛解酸內酯脫氫酶來源于
所述D-酮基泛解酸內酯還原酶來源于釀酒酵母，其氨基酸序列如SEQ ID No:4所示。
12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述多酶重組細胞還誘導產生葡萄糖脫氫酶，以葡萄糖作為輔底物，利用所述葡萄糖脫氫酶連續催化反應體系中的NADP+轉化為NADPH。
13.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述方法還包括：從反應后的反應體系中分離出D-泛解酸內酯。
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