[發明專利]治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液及其制備方法

有效

• 申請號: 201910366815.4
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN109998992B
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發明（設計）人: 丁利軍;孫海翔;徐璐;李一凡
• 申請（專利權）人: 南京鼓樓醫院
• 主分類號: A61K9/10
• 分類號: A61K9/10;A61K35/51;A61K35/16;A61K35/19;A61P9/10;C12N5/071
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 劉佳慧

1.一種治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液，其特征在于：

包括懸浮的臍帶動脈旁干細胞和溶劑。

2.根據權利要求1所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液，其特征在于：

其中，所述溶劑為富含血小板的臍帶血漿。

3.根據權利要求2所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液，其特征在于：

其中，所述臍帶動脈旁干細胞的含量為5×10⁶/mL。

4.根據權利要求1所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液，其特征在于：

其中，所述溶劑為含有人血清白蛋白的注射用PBS。

5.根據權利要求4所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液，其特征在于：

其中，所述臍帶動脈旁干細胞的含量為5×10⁶/mL；

人血清白蛋白的含量為PBS體積的5％。

6.如權利要求2所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液的制備方法，其特征在于：

臍帶動脈組織培養后衍生出動脈旁干細胞，酶解法消化獲得單個所述臍帶動脈旁干細胞，經PBS洗滌兩次后，再與所述富含血小板的臍帶血漿輕輕混勻，獲得臍帶動脈旁干細胞注射液。

7.根據權利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液，其特征在于：

其中，所述臍帶動脈旁干細胞的制備過程為：

足月生產后取新鮮人臍帶7-15cm，4h內用含有10％青鏈雙抗和1％肝素的PBS冰上4℃運至實驗室；

在超凈工作臺內取出臍帶，擠出臍帶中的血，PBS反復沖洗直至無血液和血塊后，剪刀修齊兩斷面，沿臍帶內血管長軸方向剪開臍帶，用鑷子鈍性分離臍帶動脈；

將臍帶動脈沿與臍帶動脈垂直方向剪碎至1-2mm³大小組織塊，組織塊均勻鋪于100mm細胞培養皿底，放置于5％CO²、37℃飽和濕度的培養箱內3h；

然后緩慢加入5ml DMEM-LG培養基至100mm皿中，輕放置于培養箱中培養；

第一周第3天和第7天各加DMEM-LG培養基3ml、2ml，之后第二周半量換液2次，之后第三周全量換液2次，期間觀察組織塊周圍貼壁細胞爬出情況；

3周后細胞長到80％融合時去除臍帶動脈組織塊，0.05％胰酶消化，傳代培養；

取P3-P5代細胞用于注射懸液制備。

8.根據權利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液，其特征在于：

其中，所述富含血小板的臍帶血漿的制備方法為：

在50mL離心管中加入750IU肝素鈉收集臍帶血40mL；

在室溫下200g低速離心10-15min，收集上層液體；

對所述上層液體再次2000g高速離心10min，血小板沉積離心管底部，棄去部分上清血漿，留200uL血漿及底部沉積的血小板，輕輕重懸獲得富含血小板的臍帶血漿。

9.根據權利要求6所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液，其特征在于：

其中，獲得的臍帶動脈旁干細胞的單細胞懸液，使用不含鈣、鎂的PBS洗滌2次，然后細胞沉淀采用所述富含血小板的臍帶血漿加以重懸，輕輕混勻制成臍帶動脈旁干細胞注射液；

所述臍帶動脈旁干細胞注射液放于4℃短暫儲存，12h內使用，使用前輕輕搖勻。

10.如權利要求4所述的治療缺血性疾病的臍帶動脈旁干細胞注射液的制備方法，其特征在于：

臍帶動脈組織培養后衍生出動脈旁干細胞，酶解法消化獲得單個所述臍帶動脈旁干細胞，使用不含鈣、鎂的PBS洗滌兩次，然后細胞沉淀采用含有5％人血清白蛋白的PBS加以重懸，輕輕混勻制成臍帶動脈旁干細胞注射液；

所述臍帶動脈旁干細胞注射液放于4℃短暫儲存，12h內使用，使用前輕輕搖勻。