[發(fā)明專利]一種PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)及其介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910366530.0
• 申請日: 2019-05-05
• 公開（公告）號: CN110257425B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋成義;王賽賽;高波;宗文成;沈丹;王亞麗;產(chǎn)舒恒;桑亞通
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學(xué)
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85
• 代理公司: 南京縱橫知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 薛海霞;董建林

1.一種PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于，包括可插入目的基因盒的兩個末端重復(fù)序列的轉(zhuǎn)基因供體質(zhì)粒和提供轉(zhuǎn)座活性的轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒；目的基因盒為報告基因表達盒或其它外源基因表達盒，或者基因捕獲元件；兩個末端重復(fù)序列分別如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示；轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒中含有PS CDS，PS CDS為1275bp的轉(zhuǎn)座酶序列，編碼425個氨基酸，轉(zhuǎn)座酶序列如SEQ ID No.5所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于，所述的轉(zhuǎn)基因供體質(zhì)粒包括：PS轉(zhuǎn)座子末端重復(fù)序列、目的基因表達盒；所述的轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒為轉(zhuǎn)座酶真核表達質(zhì)粒pcDNA3.9-PSase，轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒亦可作為體外轉(zhuǎn)錄載體；所述的轉(zhuǎn)基因供體質(zhì)粒序列如SEQ ID No.1所示；pcDNA3.9-PSase的序列如SEQ ID No.4所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于，所述轉(zhuǎn)基因供體質(zhì)粒的兩個末端重復(fù)序列為對Tc1/Mariner超家族中PS轉(zhuǎn)座子家族進行分子重構(gòu)所得。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于，所述轉(zhuǎn)座酶序列為對Tc1/Mariner超家族中PS轉(zhuǎn)座子家族進行分子重構(gòu)獲得；轉(zhuǎn)座酶真核表達質(zhì)粒pcDNA3.9-PSase的構(gòu)建步驟為：將PS轉(zhuǎn)座酶DNA序列與pcDNA3.9載體連接，構(gòu)建表達轉(zhuǎn)座酶的輔助質(zhì)粒，因pcDNA3.9上含有T7啟動子和T7轉(zhuǎn)錄終止序列，故轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒還可作為體外轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒；所述轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒序列如SEQ ID No.4所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于，體外轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒pcDNA3.9-PSase載體能夠利用 mMessagemMachine T7 kit試劑盒進行PS轉(zhuǎn)座酶5’加帽mRNA的體外轉(zhuǎn)錄。

6.一種基于PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)的基因轉(zhuǎn)移方法，其特征在于，是通過權(quán)利要求1-5任意一項所述的PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)按照基因克隆的方式將目的基因?qū)胧荏w基因組，所述PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)包括：可插入目的基因盒的兩個末端重復(fù)序列的轉(zhuǎn)基因供體質(zhì)粒和提供轉(zhuǎn)座活性的轉(zhuǎn)座酶輔助質(zhì)粒。

7.一種如權(quán)利要求1-5任意一項所述的PS轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，(1)轉(zhuǎn)基因供體質(zhì)粒的構(gòu)建：運用PCR技術(shù)分別克隆目的基因表達盒所需元件；構(gòu)建目的基因表達盒；通過基因克隆技術(shù)將所述目的基因表達盒克隆入PS轉(zhuǎn)座子的PS5’TIR和PS3’TIR之間，構(gòu)建轉(zhuǎn)基因供體質(zhì)粒；(2) 轉(zhuǎn)基因輔助質(zhì)粒的構(gòu)建：化學(xué)合成轉(zhuǎn)座酶序列Psase CDS，使PSase CDS與pcDNA3.9載體連接，構(gòu)建能表達或者體外轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座酶的輔助質(zhì)粒；PSase CDS為PS CDS。