[發(fā)明專利]一種檢測糧油中黃曲霉毒素B1的免疫試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910365572.2
• 申請日: 2019-05-01
• 公開（公告）號: CN111879937A
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 洪霞;杜霞;張淑雅
• 申請（專利權(quán)）人: 南京億特生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種檢測糧油中黃曲霉毒素B1的時間熒光分辨熒光免疫分析試劑盒。所述檢測黃曲霉毒素B1的時間分辨熒光免疫分析檢測試劑盒是由多孔包被板、緩沖液、黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品、黃曲霉毒素B1的抗體凍干品、銪標(biāo)記的羊抗鼠抗體、洗滌液和增強(qiáng)液所組成。所述檢測黃曲霉毒素B1的時間熒光免疫分析試劑盒的檢測方法包括下列步驟：(1)免疫原的制備；(2)包被原的制備；(3)單克隆抗體的制備；(4)樣品的前處理及檢測。本發(fā)明檢測時間短、平均回收率高、樣品前處理簡單、能現(xiàn)場操作檢測，應(yīng)用廣泛，檢測成本低，同時具有檢測特異性強(qiáng)，批內(nèi)和批間差異小、靈敏度高和操作簡單快速，且特別適合于大批量樣品的檢測等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體的說，涉及一種檢測糧油中黃曲霉毒素B1的時間分辨熒光免疫分析試劑盒。

背景技術(shù)

黃曲霉毒素（Aflatoxins，AFT）是真菌的次級代謝產(chǎn)物，主要是由黃曲霉（A.flavus）、寄生曲霉（A. parasiticus）和集蜂曲霉（A. nonius）一些菌株產(chǎn)生的；黃曲霉的產(chǎn)毒能力由于菌株的不同而差異甚大；寄生曲霉的所有菌株都能產(chǎn)生黃曲霉毒素。黃曲霉毒素是一種毒性很強(qiáng)的肝毒素，可引起肝臟的急性或慢性損害，它與乙肝病毒被認(rèn)為是肝癌的最主要的兩大誘因；除損害機(jī)體的肝臟以外，黃曲霉毒素對腎臟等其他多種組織器官也能造成嚴(yán)重?fù)p害，更為嚴(yán)重的是黃曲霉毒素已被證實(shí)具有致癌、致畸、致細(xì)胞突變的“三致”作用。黃曲霉毒素廣泛存在于花生、玉米、麥類、稻谷等谷物農(nóng)產(chǎn)品中，在通心粉、調(diào)味品、糧油和食用油等食品中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)，嚴(yán)重危害人、畜、禽類健康。黃曲霉毒素 B1 被公認(rèn)為是目前致癌力最強(qiáng)的天然物質(zhì)，1993 年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織（WHO）的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為Ⅰ類致癌物。自從 1961 年發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素以來，黃曲霉毒素的種類越來越多。目前已分離鑒定出十二種，分別是黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、B1、M2、B2a、G2a、GB1、R0 和毒醇；從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，各種黃曲霉毒素的結(jié)構(gòu)非常相似，都含有一個雙呋喃環(huán)和氧雜萘鄰?fù)ㄏ愣顾兀罢邽榛径拘越Y(jié)構(gòu)，后者可能與致癌有關(guān)。黃曲霉毒素的毒性比氰化物和砒霜大很多倍。目前已查明，黃曲霉毒素對人和很多種動物都表現(xiàn)出劇烈的毒性，而且具有明顯的致癌能力；其中黃曲霉毒素 B1 毒性最大，致癌能力最強(qiáng)，G1、B1 其次，B2、G2 和 M2 較弱。黃曲霉毒素 B1 除致癌外，還能引起突變和導(dǎo)致畸形。黃曲霉毒素 B1 的LD 50 為0.249 mg/kg, 小于 1 mg/kg，屬特劇毒物質(zhì)，其毒性為氰化鉀的 10倍、為砒霜的 68 倍。人們發(fā)現(xiàn)，黃曲霉毒素 B1 是目前所有已知致癌物中致癌力最強(qiáng)的一種。

關(guān)于黃曲霉毒素的檢測方法已經(jīng)出現(xiàn)了許多的化學(xué)檢測方法，如氣相色譜法（GC）、高效液相色譜法（HPLC）、薄層層析法、分光光度法、液質(zhì)聯(lián)用儀（LC-MS）、氣質(zhì)聯(lián)用儀（GC-MS）等。化學(xué)檢測方法存在測試成本高、分析時間長、檢測所需樣品量大（通常500 mL）及前處理步驟繁瑣等不足，無法在較大范圍內(nèi)系統(tǒng)、全面、快速分析黃曲霉毒素的含量。

而時間分辨熒光免疫分析法（TR-FIA）由于其特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡單、廉價，且特別適于大批量樣品的檢測等優(yōu)點(diǎn)而越來越被人們所重視和采用。目前還沒有針對黃曲霉毒素B1檢測的時間熒光免疫分析法的專利和文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種糧油中黃曲霉毒素B1殘留的檢測時間分辨熒光免疫分析試劑盒。

本發(fā)明的目的之二在于提供一種快速簡便地檢測糧油中黃曲霉毒素B1的時間分辨熒光免疫分析試劑盒的檢測方法，用于定量或定性地檢測農(nóng)作物中黃曲霉毒素B1殘留量。

本發(fā)明目的之一是這樣實(shí)現(xiàn)的：檢測黃曲霉毒素B1的時間分辨熒光免疫分析試劑盒，其關(guān)鍵在于由多孔包被板、緩沖液、黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品溶液、抗黃曲霉毒素B1的抗體凍干品、銪標(biāo)記的兔抗鼠抗體、洗滌液和增強(qiáng)液體所組成。