[發明專利]利用二乙酰胺四乙酸鈉對骨骼或牙齒進行DNA提取的方法在審
| 申請號： | 201910363956.0 | 申請日： | 2019-04-30 |
| 公開（公告）號： | CN110004143A | 公開（公告）日： | 2019-07-12 |
| 發明（設計）人： | 張丹;李志業;伊鵬;郭科建;宣樹卿;康成良;林改革 | 申請（專利權）人： | 山東森芃生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京和信華成知識產權代理事務所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡劍輝 |
| 地址： | 264333 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 骨骼 牙齒 四乙酸 二乙酰胺 裂解液 螯合作用 脫鈣 細胞膜 表面活性劑 高效快速 蛋白酶K 二酰胺 漂洗 鈣質 裂解 洗脫 蛋白質 消化 釋放 | ||
1.利用二乙酰胺四乙酸鈉對骨骼或牙齒進行DNA提取的方法，其特征在于：包含以下操作步驟：
(1)將300mg骨骼粉末或牙齒粉末放入離心管中，往其中加入500ul裂解液，于50-60℃條件下加熱裂解1-12小時；
(2)將步驟(1)中的離心管置于離心機中，以12000轉每分鐘的速度離心1-5分鐘，將上清液轉移至新的離心管中，加入750ul結合液并混合均勻；
(3)將步驟(2)新的離心管中的混合液轉移至離心柱中，將離心柱置于離心機中，以12000轉每分鐘的速度離心0.5-2分鐘；
(4)倒棄步驟(3)離心柱收集管中的液體，將離心柱放回離心柱收集管內，往離心柱中加入700ul漂洗液，于離心機中12000轉每分離心0.5-2分鐘；
(5)倒棄步驟(4)離心柱收集管中的液體，將離心柱放回離心柱收集管內，于離心機中12000轉每分離心2-5分鐘；
(6)將步驟(5)離心柱放入新的離心管內，往離心柱底部的硅膠膜中加入10-200ul洗脫液，靜置3-10分鐘，于離心機中以12000轉每分鐘的速度離心0.5-2分鐘，丟棄離心柱，離心管內液體即為DNA溶液。
2.根據權利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸鈉對骨骼或牙齒進行DNA提取的方法，其特征在于：步驟(1)所述裂解液包含:10-500mmol/l二乙酰胺四乙酸鈉、0.1-2％(w/v)十二烷基硫酸鈉、0.1-5mg/l蛋白酶K、0-0.1mol/l二硫蘇糖醇、5-100mmol/l三羥甲基氨基甲烷,pH值7.0-8.5。
3.根據權利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸鈉對骨骼或牙齒進行DNA提取的方法，其特征在于：步驟(2)所述結合液包含：40％-60％(w/v)異硫氰酸胍、8-18％(w/v)曲拉通X-100、50-200mmol/l檸檬酸鈉，pH值5.0-6.0。
4.根據權利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸鈉對骨骼或牙齒進行DNA提取的方法，其特征在于：步驟(3)所述離心柱為分子生物學實驗中常用耗材，其底部裝配有硅膠膜。
5.根據權利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸鈉對骨骼或牙齒進行DNA提取的方法，其特征在于：步驟(4)所述漂洗液為70-85％(v/v)乙醇。
6.根據權利要求1所述的利用二乙酰胺四乙酸鈉對骨骼或牙齒進行DNA提取的方法，其特征在于：步驟(6)所述洗脫液包含10mmol/l三羥甲基氨基甲烷、1mmol/l乙二胺四乙酸二鈉，pH8.0。
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