[發明專利]環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201910363511.2
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110146696B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 李培武;李慧;唐曉倩;張兆威;張文
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

本發明公開了環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒及其應用。它包括熒光試紙條和含有銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體凍干品的樣品反應瓶，其中所述熒光試紙條包括底板，底板的粘性面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線，質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，檢測線上包被環匹阿尼酸?卵清蛋白偶聯物；所述抗環匹阿尼酸單克隆抗體由保藏編號為CCTCC NO.C201871的雜交瘤細胞株YTT?2分泌產生。其可用于環匹阿尼酸的檢測，具有操作簡單、快速、靈敏度高的特點。

技術領域

本發明涉及環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒及其應用。

背景技術

環匹阿尼酸首先在圓弧青霉菌中發現并分離，主要由青霉菌屬和曲霉菌屬真菌產生一種次級代謝產物。環匹阿尼酸性質穩定，一般的儲存條件和加工過程不能破壞，即使經過巴氏殺菌，也幾乎完全不能被破壞。環匹阿尼酸可污染花生、玉米、飼料等多種農產品，人和動物攝入后，會引起心肌細胞變性、重量減輕和共濟失調等癥狀，對人們的飲食安全造成重大威脅。

目前，現有環匹阿尼酸檢測方法包括薄層層析法、高效液相色譜法、液相色譜-質譜聯用法等。其中薄層層析法不需要特殊的儀器設備，但試劑用量大、操作繁瑣、不能準確定量，且對實驗人員和周圍環境污染危害較大。高效液相色譜法、液相色譜-質譜聯用法等精密儀器分析法靈敏度高，準確性好，但又有儀器昂貴，樣品前處理過程繁瑣，耗時長，對實驗環境要求高等不足，難以實現快速檢測。免疫分析技術克服了前兩者的缺點，具有特異性強、靈敏度高、樣品前處理簡單、對環境的污染危害小、適于現場批量檢測等優點，已應用于食品、醫療等多個領域。

發明內容

本發明所要解決的問題是提供一種環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒及其應用。該免疫層析時間分辨熒光試劑盒可用于環匹阿尼酸的檢測，具有操作簡單、快速、靈敏度高的特點。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

環匹阿尼酸的免疫層析時間分辨熒光試劑盒，它包括熒光試紙條和含有銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體凍干品的樣品反應瓶，其中所述熒光試紙條包括底板，底板的粘性面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線，質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，檢測線上包被環匹阿尼酸-卵清蛋白偶聯物；所述抗環匹阿尼酸單克隆抗體由保藏編號為CCTCC NO.C201871的雜交瘤細胞株YTT-2分泌產生，所述的雜交瘤細胞株YTT-2于2018年3月23日保藏于中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是，中國，武漢，武漢大學，保藏編號為CCTCC NO.C201871。

按上述方案，所述銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體是按照以下方法制備得到的：將抗環匹阿尼酸單克隆抗體和活化后的銪標記試劑在硼酸緩沖液中混合、振蕩反應，然后經離心、復溶、封閉步驟得到目標產物銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體；1mL活化后的銪標記試劑可偶聯抗環匹阿尼酸單克隆抗體：40μg～90μg。

按上述方案，所述的活化方法為取銪標記試劑，用pH 8.2 0.2M的硼酸緩沖液超聲分散，然后緩慢加入碳二亞胺溶液，室溫振蕩活化，離心去上清，用pH 8.2 0.2M的硼酸緩沖液復溶，備用，所述的活化時間為15～30min。

上述配制好的銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體復溶于含1.5％(m/v)海藻糖、2％(m/v)牛血清白蛋白的0.01mol/L pH 7.4的磷酸緩沖液中備用，使用時，取一定量的銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體放入樣品反應瓶中，置于冷凍干燥機中凍干，得到銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體凍干品，備用。