[發明專利]環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201910363511.2
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110146696B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 李培武;李慧;唐曉倩;張兆威;張文
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/533;G01N21/64
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：它包括熒光試紙條和含有銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體凍干品的樣品反應瓶，其中所述熒光試紙條包括底板，底板的粘性面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊和樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，檢測墊以硝酸纖維素膜為基墊，硝酸纖維素膜上自上而下設置橫向質控線和檢測線，質控線包被有兔抗鼠多克隆抗體，檢測線上包被環匹阿尼酸-卵清蛋白偶聯物；所述抗環匹阿尼酸單克隆抗體由保藏編號為CCTCC NO.C201871的雜交瘤細胞株YTT-2分泌產生，所述抗環匹阿尼酸單克隆抗體的重鏈可變區序列如SEQ ID NO:3所示，輕鏈可變區序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根據權利要求1所述的環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體是按照以下方法制備得到的：將抗環匹阿尼酸單克隆抗體和活化后的銪標記試劑在硼酸緩沖液中混合、振蕩反應，然后經離心、復溶、封閉步驟得到目標產物銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體；1mL活化后的銪標記試劑偶聯抗環匹阿尼酸單克隆抗體：40μg～90μg。

3.根據權利要求2所述的環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述的活化方法為取銪標記試劑，用pH 8.2 0.2M的硼酸緩沖液超聲分散，然后緩慢加入碳二亞胺溶液，室溫振蕩活化，離心去上清，用pH 8.2 0.2M的硼酸緩沖液復溶，備用，所述的活化時間為15～30min。

4.根據權利要求1所述的環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述熒光試紙條中的吸水墊長16～18mm，寬3～4mm；檢測墊長18～30mm，寬3～4mm；樣品墊長10～12mm，寬3～4mm，相鄰各墊的交疊長度為1～3mm；所述熒光試紙條中檢測墊上的檢測線與硝酸纖維素膜上沿的間距為15～20mm，質控線和檢測線的間距為5～10mm；所述的樣品反應瓶為1-5mL的卡口瓶。

5.根據權利要求1所述的環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述熒光試紙條中檢測墊上每厘米檢測線所需的環匹阿尼酸-卵清蛋白偶聯物CPA-OVA的包被量為100～400ng；每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為100～300ng；所述樣品反應瓶中銪標記的抗環匹阿尼酸單克隆抗體的含量為100～200ng。

6.根據權利要求1所述的環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：其還包括樣品稀釋液和樣品稀釋液吸管，所述的樣品稀釋液為體積分數為0.01～0.30％的吐溫-20水溶液。

7.根據權利要求1所述的環匹阿尼酸免疫層析時間分辨熒光試劑盒，其特征在于：所述的熒光試紙條的制備方法如下：

(1)將吸水紙剪裁得吸水墊；

(2)檢測墊的制備：

將環匹阿尼酸-卵清蛋白偶聯物CPA-OVA用包被緩沖液配制成濃度為0.2～0.5mg/mL的包被液，于距硝酸纖維素膜上沿15～20mm的位置，用線噴方式將其橫向包被于硝酸纖維素膜上，得到檢測線，每厘米檢測線所需環匹阿尼酸-卵清蛋白偶聯物的包被量為80～400ng，然后于37～40℃條件下干燥60～120分鐘；

將兔抗鼠多克隆抗體用包被緩沖液配成濃度為0.2～0.5mg/mL的包被液，于距檢測線5～10mm的位置，用線噴方式將其橫向包被于硝酸纖維素膜上，得質控線，每厘米質控線所需的兔抗鼠多克隆抗體的包被量為100～300ng，然后于37～40℃條件下干燥60～120分鐘；

(3)樣品墊的制備：

將玻璃纖維膜放入封閉液中浸濕，取出，于37～40℃條件下干燥10～16小時，得樣品墊，然后置干燥器中室溫保存；

(4)熒光試紙條的組裝：

在紙板的一面從上到下依次粘貼吸水墊、檢測墊、樣品墊，相鄰各墊在連接處交疊連接，交疊長度為1～3mm，即得熒光試紙條。