[發明專利]Hel112解旋酶在聚合酶鏈式反應中的應用、組合物及試劑盒

有效

• 申請號: 201910360658.6
• 申請日: 2019-04-30
• 公開（公告）號: CN110066855B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 龔敬文
• 申請（專利權）人: 深圳市剛竹醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6848
• 分類號: C12Q1/6848;C12P19/34;C12N9/14;C12N15/55;C12N15/70
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 任星宇;何平

1.?Hel112解旋酶在聚合酶鏈式反應中的應用，Hel112解旋酶添加至PCR的反應體系中，以增強聚合酶鏈式反應擴增特異性和擴增效率，所述Hel112解旋酶為SsoHel112解旋酶，所述Hel112解旋酶的氨基酸序列為SEQ?ID?NO.1，所述Hel112解旋酶在PCR的反應體系中的濃度為2ng/μl至4ng/μl，所述PCR的反應體系用于擴增人類DNA。

2.?根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述Hel112解旋酶的表達基因的堿基序列為SEQ?ID?NO.2。

3.根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述Hel112解旋酶的制備方法包括如下步驟：

將Hel112解旋酶的表達基因插入到大腸桿菌表達載體pET28a的NheI/BamHI位點，構建質粒pET28a-hel112；

將質粒pET28a-hel112轉化到Rosetta大腸桿菌宿主菌中；

將Rosetta大腸桿菌宿主菌置于含有氯霉素和卡那霉素的培養基中進行培養，

向培養基中加入IPTG以誘導培養制備得到所述Hel112解旋酶。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述向培養基中加入IPTG以誘導培養制備得到所述Hel112解旋酶，具體為：

向培養基中加入IPTG以誘導培養；

收集誘導培養后的Rosetta大腸桿菌宿主菌，Buffer?A沖懸，破碎細胞；

離心取上清，80℃保溫20分鐘，離心取上清，上清加載至Buffer?A平衡的Ni層析柱，Buffer?A洗滌層析柱后，25mM-500mM咪唑進行梯度洗脫，收集洗脫峰；收集的樣品于BufferA透析；透析后的樣品加載于含Heparin?Sepharose介質的層析柱，用Buffer?A洗滌層析柱，100mM-1M?KCl進行梯度洗脫，收集洗脫峰，制得所述Hel112解旋酶的溶液。