[發明專利]用于分枝桿菌菌種鑒定的寡核苷酸組合、方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201910360038.2
• 申請日: 2019-04-29
• 公開（公告）號: CN110079621B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 戴立忠;孫青芝;任小梅;譚德勇;毛君杰;李倩;程星;鄧中平
• 申請（專利權）人: 圣湘生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 李強;張穎玲

1.一種寡核苷酸組合，包括：

第一組：檢測偶然分枝桿菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:5、6和19所示，以及檢測胞內分枝桿菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:11、12、23和27所示；還包括選自以下組中的至少兩組：

第二組：檢測堪薩斯分枝桿菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:1、2和17所示，以及檢測膿腫分枝膿腫亞種的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:7、8、21和25所示；

第三組：檢測鳥分枝桿菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:3、4和18所示，以及檢測結核分枝桿菌的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:9、10、22和26所示；以及

第四組：檢測膿腫分枝馬賽亞種的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:13、14、24和28所示。

2.根據權利要求1所述的寡核苷酸組合，其中，第四組還包括檢測內標的寡核苷酸，其序列如SEQ ID NO:15、16和20所示。

3.根據權利要求1或2所述的寡核苷酸組合，其中，所述寡核苷酸組合的熒光報告基團選自FAM、HEX、VIC、ROX、CY5、5-TAMRA、TET、CY3和JOE。

4.根據權利要求3所述的寡核苷酸組合，其中，所述寡核苷酸組合中的第一組的熒光報告基團為ROX、第二組為FAM、第三組為HEX或者VIC，以及第四組為CY5。

5.權利要求1-4中任一項所述的寡核苷酸組合在制備檢測分枝桿菌的試劑盒中的用途。

6.一種試劑盒，包括如權利要求1-4中任一項所述的寡核苷酸組合。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其中，進一步包括提取DNA所需試劑、Mg²⁺、dNTPs、DNA聚合酶、PCR緩沖液中的至少一種。

8.一種用于以非診斷目的檢測分枝桿菌的方法，包括以下步驟：

1）提取待測樣品的DNA；

2）使用如權利要求1-4中任一項所述的寡核苷酸組合對步驟1）獲得的DNA擴增；

3）分析結果。

9.根據權利要求8所述的方法，其中，所述步驟3）中，采用Ct值作為堪薩斯分枝桿菌、鳥分枝桿菌、偶然分枝桿菌和內標的判定標準；并且采用熔解曲線作為膿腫分枝膿腫亞種、結核分枝桿菌、胞內分枝桿菌和膿腫分枝馬賽亞種的判定標準。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其中，所述步驟2）中的寡核苷酸組合的濃度由如下所示：

組份 濃度

SEQ ID NO:1-16 100-500nM

SEQ ID NO:17-20 50-250nM

SEQ ID NO:21-24 50-250nM

SEQ ID NO:25-28 50-250nM。