[發明專利]一種茶樹熱激蛋白CssHSP-6基因的重組載體和表達方法在審
| 申請號： | 201910357329.6 | 申請日： | 2019-04-29 |
| 公開（公告）號： | CN110117604A | 公開（公告）日： | 2019-08-13 |
| 發明（設計）人： | 謝鑫;李向陽;蔣君梅;任明見 | 申請（專利權）人： | 貴州大學 |
| 主分類號： | C12N15/66 | 分類號： | C12N15/66;C12N15/70;C12P21/02;C07K14/415 |
| 代理公司： | 貴陽中新專利商標事務所 52100 | 代理人： | 張行超 |
| 地址： | 550025 貴州省貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 茶樹熱激蛋白 基因 重組載體 抗病性 原核表達載體 可溶性蛋白 生物學特性 蛋白表達 蛋白晶體 茶樹 構建 優化 研究 | ||
1.一種茶樹熱激蛋白CssHSP-6基因的重組載體，其特征在于，所述重組載體的制備方法如下：提取茶樹葉片的RNA，并反轉錄出cDNA；以cDNA為模板擴增CssHSP-6基因；將CssHSP-6擴增產物經EcoRI和XhoI雙酶切后，通過DNA連接酶插入到經同樣雙酶切的pET-28a表達載體中，得到重組質粒pET-28a-CssHSP-6。
2.根據權利要求1所述的重組載體，其特征在于，以cDNA為模板，利用以下引物擴增CssHSP-6基因，引物序列如下：
上游引物：CssHSP-6-F：GC
下游引物：CssHSP-6-R：CG
上下游引物分別如SEQ ID NO.3、4所示。
3.一種表達茶樹熱激蛋白CssHSP-6基因的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)用權利要求1或2所述的重組載體轉化大腸桿菌細胞，得到表達CssHSP-6的重組原核表達菌株；
(2)將重組原核表達菌株接種到卡那霉素液體培養基或卡那霉素+氯霉素液體培養基中，過夜培養活化菌株；
(3)將活化的重組原核表達菌株轉接到卡那霉素液體培養基或卡那霉素+氯霉素液體培養基中，震蕩培養后加入IPTG誘導重組CssHSP-6的表達；
(4)誘導完成后，回收并純化所表達的CssHSP-6重組蛋白。
4.根據權利要求3所述的表達茶樹熱激蛋白CssHSP-6基因的方法，其特征在于，步驟(3)中在震蕩培養至OD600＝0.5時，加入終濃度為0.8mM的IPTG，在37℃誘導培養。
5.根據權利要求3所述的表達茶樹熱激蛋白CssHSP-6基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素液體培養基中卡那霉素為50ug/mL。
6.根據權利要求3所述的表達茶樹熱激蛋白CssHSP-6基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素+氯霉素液體培養基中卡那霉素為50ug/mL，氯霉素為50ug/mL。
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