[發明專利]化合物及其在制備抗結核藥物中的應用

在審

• 申請號: 201910355265.6
• 申請日: 2019-04-29
• 公開（公告）號: CN109988129A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 張立新;代煥琴;謝峰;李崢;王秋水;胡建森
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C07D307/68
• 分類號: C07D307/68;A61K31/341;A61P31/06;C12P17/16;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 吳愛琴

1.式I或式II所示化合物：

2.制備權利要求1中式I和式II所示化合物的方法，包括如下步驟：

1)疣孢菌MS100137種子液的制備；

2)將步驟1)制備得到的疣孢菌MS100137種子液接種入發酵培養基，振蕩培養連續發酵，得到含有式I和式II所示化合物的發酵體系；

3)由步驟2)得到的發酵體系中分離純化，得到式I和式II所示化合物。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：步驟1)中，疣孢菌MS100137種子液的制備包括：將疣孢菌MS100137進行平板培養；挑取所得平板菌種單克隆接種至種子培養基，振蕩培養，得到疣孢菌MS100137種子液。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述平板培養所用的平板培養基通過下述方法制備：將10克可溶性淀粉、10克葡萄糖、10克甘油、2.5克玉米漿、5克蛋白胨、2克酵母提取物、1克氯化鈉、20克瓊脂粉溶于水，調pH至7.3后加入3克碳酸鈣，定容至1 L，115℃滅菌30分鐘；

所述平板培養的操作為：將MS100137涂布于Ver01固體平板上，28℃培養4-5天至形成單個橘色菌落；

所述種子培養基通過下述方法制備：將10克可溶性淀粉、10克葡萄糖、10克甘油、2.5克玉米漿、5克蛋白胨、2克酵母提取物、1克氯化鈉粉溶于水，調pH至7.3后加入3克碳酸鈣，用水定容至1L，115℃滅菌30分鐘；

所述振蕩培養的條件為：28℃、200rpm振蕩培養3-5天。

5.根據權利要求2-4中任一項所述的方法，其特征在于：步驟2)中，所述發酵培養基通過下述方法制備：將10克可溶性淀粉、10克葡萄糖、10克甘油、2.5克玉米漿、5克蛋白胨、2克酵母提取物、1克氯化鈉粉溶于水，調pH至7.3后加入3克碳酸鈣，用水定容至1L，115℃滅菌30分鐘；

所述振蕩培養連續發酵的條件為：28℃、200rpm振蕩培養連續發酵8-10天。

6.根據權利要求2-5中任一項所述的方法，其特征在于：步驟3)中，所述分離純化的操作為：

a)先將步驟2)得到的發酵體系，用乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯相，蒸干乙酸乙酯；

b)將得到的蒸干后樣品，分別用環己烷、甲醇和乙酸乙酯進行溶解；將各樣品用凝膠柱Sephadex LH20進行分離，以體積比1:1的甲醇/二氯甲烷作為流動相進行洗脫，制備成不同餾分并蒸干；

c)將步驟b)所得餾分重新溶解于甲醇，過濾去除不溶物后進行反向高效液相色譜分離；分別收集峰值的保留時間為10.00min與9.23min的峰的洗脫液，減壓蒸干后得到化合物proximicinD與proximicinE。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述反向高效液相色譜的條件：采用Agilent Eclipse XDB C-8反相色譜柱(9.4×250mm)；流動相為加有0.01％(V/V)三氟乙酸(TFA)的乙腈或乙腈和水的混合物；洗脫時間為38min，流速為3毫升/分鐘；洗脫過程中，乙腈在流動相中的體積百分比在25min內從5％線性上升至40％，之后在2min內線性上升至100％，維持100％5min，在1min內線性降至5％，維持5min結束；檢測波長為254納米。

8.權利要求1所述的式I或式II所示化合物在制備抗結核藥物中的應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于：所述應用為：式I和式II所示化合物在制備抗結核分枝桿菌的藥物中的應用。

10.一種抗結核藥物，其活性成分為權利要求1所述的式I或式II所示化合物。