[發明專利]一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法

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• 申請號: 201910352697.1
• 申請日: 2019-04-29
• 公開（公告）號: CN109991334A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 劉文偉
• 申請（專利權）人: 武漢伯瑞恒醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/88
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本發明公開了一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法，包括以下步驟：儲備液的配制、工作液的配制、標準曲線和質控樣本的配制、樣品預處理方法以及LC?MS/MS分析；本法建立了一種簡單、快速、耐用、靈敏度高和選擇性好的用于同時測定EDTA?K2抗凝人血漿中洛索洛芬及其活性代謝物反式?OH血藥濃度的LC?MS/MS方法，該方法可用于EDTA?K2抗凝人血漿中洛索洛芬和反式?OH體洛索洛芬的同時定量分析，與熒光法和紫外檢測法相比，本法更為靈敏，洛索洛芬的定量下限從0.31mg/mL和0.20mg/mL降低到了0.050mg/mL，反式?OH體洛索洛芬的定量下限從0.31mg/mL和0.20mg/mL降低到了0.010mg/mL，同時分析時間大為縮短，從25min和30min縮短到了3.5min。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體為一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法。

背景技術

洛索洛芬鈉為非甾體類消炎鎮痛藥，具顯著的鎮痛、抗炎、解熱的作用，尤其具有較強的鎮痛作用，作為新型的非甾體類消炎藥，洛索洛芬鈉與其他藥物不同的是該藥是一個前體藥物，本身沒有活性，經肝臟迅速轉化成反式-OH體以后才有活性，因此可減少對胃腸道的損害。

目前，藥物藥代動力學以及生物等效性的研究均通過測定藥物的藥動學參數來評價，因此，血漿中洛索洛芬及其活性代謝物反式-OH的濃度測定對于洛索洛芬鈉新藥開發顯得極為重要，洛索洛芬的代謝物除了反式-OH體外，還有順式-OH體，兩代謝物互為對映體，結構上的極為相似性決定了很難從色譜和質譜上將其分離；另外，洛索洛芬和反式-OH體在人血漿中濃度差異大，同時定量人血漿中洛索洛芬和反式-OH體濃度的生物分析方法鮮有報道，目前，能同時測定洛索洛芬及其活性代謝物反式-OH體血藥濃度的定量分析方法主要以HPLC法為主，LC-MS/MS 法未有報道。

至今，有兩種HPLC法能同時測定血漿中洛索洛芬及其活性代謝物反式-OH體的濃度，分別是熒光法和紫外檢測法，這兩種方法雖然達到了分離順式-OH體和反式-OH體的目的，但前處理過程均很復雜，并且靈敏度低，線性范圍窄，分析時間長，無法滿足快速分析大批量樣本的需要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法，以解決背景技術提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法，包括以下步驟：

S1：儲備液的配制：用甲醇：水（1：1，v：v）作為稀釋液溶解洛索洛芬和反式-OH體洛索洛芬對照品，得濃度為400μg/mL的洛索洛芬標準曲線儲備液（STD Stock-LSLF）和洛索洛芬質控儲備液（QC Stock-LSLF），濃度為200μg/mL的反式-OH體洛索洛芬標準曲線儲備液（STDStock-Trans-OH）和反式-OH體洛索洛芬質控儲備液（QC Stock-Trans-OH）；

S2：工作液的配制：標準曲線工作液以STD Stock-LSLF和STD Stock-Trans-OH為起始溶液，以甲醇：水（1：1，v：v）溶液為稀釋溶劑逐級稀釋得到同時含有洛索洛芬和反式-OH體洛索洛芬的各級標準曲線工作液；質控工作液以QC Stock-LSLF和QC Stock-Trans-OH為起始溶液，以甲醇：水（1：1，v：v）溶液為稀釋溶劑逐級稀釋得到同時含有洛索洛芬和反式-OH體洛索洛芬的各級質控工作液；

S3：標準曲線和質控樣本的配制：吸取95%體積的EDTA-K2抗凝人空白血漿，加入5%體積上述各濃度的工作液，得到曲線樣本和質控樣本；

S4：樣品預處理方法：取50μL血漿樣品于96孔板中，加入內標溶液30μL(氘代洛索洛芬2μg/mL)，加入沉淀劑甲醇 450μL，震蕩5min，高速離心(4000rpm)15分鐘，取上清200μL 于另一96 深孔板中，高速離心(4000 rpm)3分鐘后進LC-MS/MS 分析，進樣體積1μL；