[發明專利]一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法

在審

• 申請號: 201910352697.1
• 申請日: 2019-04-29
• 公開（公告）號: CN109991334A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 劉文偉
• 申請（專利權）人: 武漢伯瑞恒醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/88
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1.一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：儲備液的配制：用甲醇：水（1：1，v：v）作為稀釋液溶解洛索洛芬和反式-OH體洛索洛芬對照品，得濃度為400μg/mL的洛索洛芬標準曲線儲備液（STD Stock-LSLF）和洛索洛芬質控儲備液（QC Stock-LSLF），濃度為200μg/mL的反式-OH體洛索洛芬標準曲線儲備液（STDStock-Trans-OH）和反式-OH體洛索洛芬質控儲備液（QC Stock-Trans-OH）；

S2：工作液的配制：標準曲線工作液以STD Stock-LSLF和STD Stock-Trans-OH為起始溶液，以甲醇：水（1：1，v：v）溶液為稀釋溶劑逐級稀釋得到同時含有洛索洛芬和反式-OH體洛索洛芬的各級標準曲線工作液；質控工作液以QC Stock-LSLF和QC Stock-Trans-OH為起始溶液，以甲醇：水（1：1，v：v）溶液為稀釋溶劑逐級稀釋得到同時含有洛索洛芬和反式-OH體洛索洛芬的各級質控工作液；

S3：標準曲線和質控樣本的配制：吸取95%體積的EDTA-K2抗凝人空白血漿，加入5%體積上述各濃度的工作液，得到曲線樣本和質控樣本；

S4：樣品預處理方法：取50μL血漿樣品于96孔板中，加入內標溶液30μL(氘代洛索洛芬2μg/mL)，加入沉淀劑甲醇 450μL，震蕩5min，高速離心(4000rpm)15分鐘，取上清200μL 于另一96 深孔板中，高速離心(4000 rpm)3分鐘后進LC-MS/MS 分析，進樣體積1μL；

S5：LC-MS/MS分析：LC-MS/MS系統由Q-Trap 5500 型三重四極桿串聯質譜儀（ABSciex）、高壓泵（LC-30AD）、在線脫氣機（DGU-20A-5R）、自動進樣器（SIL-30AC）、柱溫箱（CTO-20A）及控制器CBM-20Alite組成；柱溫箱和進樣器的溫度分別設定為40℃和4℃，使用型號為Welch，Ultimate XP-C18, 5.0 μm, 2.1*100 mm的色譜柱作為分離柱，乙腈：水：乙酸（40：60：1，v：v：v）作為流動相，等度條件，流速為0.60mL/min分離分析物，分析時間為3.5分鐘；離子源的極性為正模式，離子監測方式為多反應監測（MRM），經過電參數優化后，去簇電壓（DP）分別為-80、50、55V，碰撞電壓（CE）分別為-18、-11和-19V，數據采集系統為Analyst1.6.3。

2.根據權利要求1所述的一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法，其特征在于：所述S5中高壓泵的型號為LC-30AD、在線脫氣機的型號為DGU-20A-5R、自動進樣器的型號為SIL-30AC、柱溫箱的型號為CTO-20A、控制器的型號為CBM-20Alite。

3.根據權利要求1所述的一種測定血漿中洛索洛芬及其反式羥基體濃度的方法，其特征在于：所述S5中洛索洛芬、反式-OH體洛索洛芬以及內標(氘代洛索洛芬)的離子對分別為245.1-83.1、247.1-203.1和249.1-87.1。