[發明專利]用于敲除RBP4基因的sgRNA、RBP4基因缺失細胞株的構建方法及應用有效
| 申請號： | 201910352152.0 | 申請日： | 2019-04-29 |
| 公開（公告）號： | CN110229816B | 公開（公告）日： | 2023-06-06 |
| 發明（設計）人： | 王慶;王飛;李若碧;昌沖;夏敏 | 申請（專利權）人： | 中山大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/90;C12N15/867;C12N9/22;C12N5/10 |
| 代理公司： | 廣州三環專利商標代理有限公司 44202 | 代理人： | 陳歡 |
| 地址： | 510080 廣東省廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 rbp4 基因 sgrna 缺失 細胞株 構建 方法 應用 | ||
1.一種用于敲除RBP4基因的sgRNA序列，其特征在于，所述sgRNA的靶DNA序列如SEQ?IDNO:3所示。
2.一種敲除人肝癌細胞RBP4基因的非疾病診斷治療方法，其特征在于，為利用CRISPR/Cas系統在體外對人肝癌細胞中的RBP4基因進行改造，具體包括如下步驟：
1)人工合成如權利要求1所述的靶DNA序列及其互補鏈；
2)將所合成的核酸片段插入到sgRNA骨架表達質粒載體的多克隆位點并轉化，挑單克隆菌株，提取sgRNA重組質粒，測序鑒定獲得測序正確的sgRNA重組質粒；其中，sgRNA骨架表達質粒載體還表達Cas9核酸酶；
3)采用慢病毒轉染法將sgRNA重組質粒轉染人肝癌細胞，即得敲除RBP4基因的人肝癌細胞。
3.一種RBP4基因缺失細胞株的構建方法，其特征在于，對如權利要求2所得的敲除RBP4基因的人肝癌細胞進行傳代篩選，獲得穩定敲除RBP4的人肝癌細胞。
4.一種RBP4基因缺失細胞株，其特征在于，為采用如權利要求3所述的RBP4基因缺失細胞株的構建方法制備所得。
5.一種如權利要求1所述的用于敲除RBP4基因的sgRNA序列在制備用于在體外對人肝癌細胞基因組中進行RBP4基因定點敲除試劑盒中的應用。
6.一種用于在體外對人肝癌細胞基因組中進行RBP4基因定點敲除試劑盒，其特征在于，包括如下1)-2)中的任一種：
1)如權利要求1所述的用于敲除RBP4基因的sgRNA序列；
2)如權利要求2所述的sgRNA重組質粒。
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