[發明專利]復雜樣本的蛋白檢測方法

有效

• 申請號: 201910351754.4
• 申請日: 2019-04-28
• 公開（公告）號: CN110133170B
• 公開（公告）日: 2022-01-07
• 發明（設計）人: 秦鈞;汪宜;丁琛;李愷;宋雷;石文昊;劉明偉
• 申請（專利權）人: 北京谷海天目生物醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 路秀麗

1.一種復雜樣本的蛋白檢測方法，其特征在于，所述方法包括：

對所述復雜樣本進行色譜分離以及質譜掃描采集質譜數據，其中，在所述質譜掃描采集所述質譜數據的過程中，采用DDA模式掃描采集的過程中穿插PRM模式的掃描采集，所述PRM模式的掃描采集設置在所述DDA模式掃描采集過程中不同的時間窗口，在同一所述時間窗口內所述DDA模式被所述PRM模式擠壓，所述PRM模式所采集數據的時間擠占了所述DDA模式所采集數據的時間；

對所述質譜數據中的蛋白進行定性和定量分析，獲得所述復雜樣本的全譜蛋白的表達信息；

其中，在所述復雜樣本中，目標蛋白的靶向肽段所對應的時間窗口進行所述PRM模式的掃描采集。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，采用四級桿質譜儀或三合一質譜儀進行所述DDA模式掃描和所述PRM模式的掃描采集。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，對所述質譜數據中的蛋白定量進行分析的步驟包括：

利用所述DDA模式采集的所述質譜數據根據一級質譜峰面積進行定量分析；

利用所述PRM模式采集的所述質譜數據根據所述靶向肽段中前三高的二級碎片離子的加和進行定量分析。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，采用色譜分析柱對所述復雜樣本進行色譜分離，其中所述色譜分析柱包括：

色譜柱管，所述色譜柱管的外徑為355~365μm，內徑為100~200μm；

填充于所述色譜柱管內的填料，所述填料為C18填料；以及

與所述色譜柱管一體化設計的色譜柱尖。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述色譜柱管的長度為150~300mm。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述色譜柱尖的內徑為2~8μm。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述色譜柱尖的內徑為3~6μm。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述填料的粒徑為1.5~3μm。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述填料的粒徑為1.8~2.5μm。

10.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述色譜分離的步驟中，采用75~150min的色譜分離梯度進行分離。

11.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述復雜樣本為組織樣本、細胞樣本或者體液樣本。

12.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，所述復雜樣本為植物樣本、動物樣本或微生物樣本。

13.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述目標蛋白為基于所述DDA模式采集的質譜歷史數據中的一種或多種蛋白。