[發(fā)明專利]用于三陰性乳腺癌靶向治療的RNA三螺旋水凝膠的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910346420.8
• 申請(qǐng)日: 2019-04-26
• 公開（公告）號(hào): CN110038025B
• 公開（公告）日: 2021-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李雪梅;丁來(lái)榮;趙飛浪;張書圣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 臨沂大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K31/7105
• 分類號(hào): A61K31/7105;A61K9/06;A61K48/00;A61P15/14;A61P35/00;C12N15/10
• 代理公司: 成都方圓聿聯(lián)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51241
• 代理人: 曹少華

本發(fā)明公開了一種RNA三螺旋水凝膠用于三陰性乳腺癌靶向治療的制備方法。所述載體為純RNA體系，通過(guò)滾環(huán)轉(zhuǎn)錄的方式形成，在轉(zhuǎn)錄復(fù)制過(guò)程中產(chǎn)生治療型基因CXCR4，還雜交另外兩條治療型microRNA:腫瘤抑制的microRNA和oncomiR抑制劑；在直鏈模板上設(shè)計(jì)有可以靶向MDA?MB?231細(xì)胞的核酸適體的互補(bǔ)序列，在所述的核酸適體的互補(bǔ)序列上設(shè)計(jì)有膽固醇，高速離心后形成RNA水凝膠。該RNA三螺旋水凝膠成功應(yīng)用于藥物緩釋體系，生物相容性較好，且三螺旋結(jié)構(gòu)的加入使該RNA水凝膠可同時(shí)遞送三種治療型基因，對(duì)靶向性細(xì)胞MDA?MB?231腫瘤細(xì)胞的抑制生長(zhǎng)作用及生物醫(yī)藥等領(lǐng)域具有廣闊前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物化學(xué)納米材料技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于三陰性乳腺癌靶向治療的RNA三螺旋水凝膠的制備方法。

背景技術(shù)

乳腺癌是女性最常見的癌癥之一，三陰性乳腺癌(TNBCs)指的是乳腺癌的一種缺乏表達(dá)雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)類型。臨床研究證明TNBCs較其他類型的乳腺癌是最具侵略性的一種乳腺癌，其預(yù)后不良，死亡率和轉(zhuǎn)移傾向更為難以控制。傳統(tǒng)療法包括激素治療，靶向治療三個(gè)受體，但治療效果差強(qiáng)人意。因此，更有效的發(fā)展TNBCs診斷和聯(lián)合療法是緊迫和重要。

趨化因子受體治療型基因CXCR4已被證明是人類癌癥轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素之一，CXCR4通過(guò)與配體相互作用，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子受體，其在造血祖/干細(xì)胞的遷移中扮演重要的角色，乳腺癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移在動(dòng)物模型中通過(guò)用RNA成功阻止趨化因子受體CXCR4基因表達(dá)得以成功鎖定。

位于Trpm1基因內(nèi)含子6上的miRNA-221，是一種控制Cyclin D1和CDK6表達(dá)的腫瘤抑制因子，microRNA-221的信使RNA會(huì)刺激引出MDA-MB-231和SKBr3乳腺癌細(xì)胞及腫瘤微環(huán)境。microRNA-205通過(guò)調(diào)節(jié)體內(nèi)和體外降低細(xì)胞增殖的靶向基因E2F1和LAMC1而在三陰性乳腺癌中占有重要地位。

針對(duì)以上現(xiàn)有問(wèn)題以及純RNA水凝膠的優(yōu)點(diǎn)，目前亟需研究一種新興的僅由RNA分子自組裝的高效治療三陰性乳腺癌的水凝膠及其制備方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題為：提供一種僅由RNA分子自組裝的具有高效，毒副性較低，生物相容性較好等優(yōu)點(diǎn)的高效治療三陰性乳腺癌的水凝膠的制備。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

用于三陰性乳腺癌靶向治療的RNA三螺旋水凝膠的制備方法，首先設(shè)計(jì)直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板，通過(guò)滾環(huán)轉(zhuǎn)錄的方式形成純RNA體系的水凝膠，直鏈DNA中設(shè)計(jì)了CXCR4序列的反義序列及后面可以搭載兩種治療基因的三螺旋反義序列，在轉(zhuǎn)錄復(fù)制過(guò)程中產(chǎn)生治療型基因CXCR4，然后將另外兩種治療型microRNA及靶向MDA-MB-231細(xì)胞的核酸適體通過(guò)Waston-Crick和Hoogsteen堿基互補(bǔ)配對(duì)原則雜交，離心形成RNA三螺旋水凝膠納米結(jié)構(gòu)。

進(jìn)一步地，所述直鏈DNA轉(zhuǎn)錄模板的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，且5’端磷酸化。

進(jìn)一步地，所述另外兩種治療型microRNA為腫瘤抑制的microRNA和oncomiR抑制劑。

進(jìn)一步地，所述另外兩種治療型microRNA核苷酸序列如SEQ ID No.2和SEQ IDNo.3所示，且它們的5’端具有FAM基團(tuán)。

進(jìn)一步地，靶向MDA-MB-231細(xì)胞的核酸適體為Fam-LXLapt-DNA-Chol，其為SEQ IDNo.4所示的核苷酸序列且5’端修飾有Fam基團(tuán)、3’端修飾有膽固醇。

用于三陰性乳腺癌靶向治療的RNA三螺旋水凝膠的制備方法，具體步驟如下：

(1)取SEQ ID No.1所示且5’端磷酸化的直鏈DNA模板與T7啟動(dòng)子以相同濃度進(jìn)行退火處理；