[發(fā)明專利]一種靶向標記MMP-2的磁共振分子探針的構(gòu)建方法

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• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN110064061A
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鐘士江;單煜恒;張哲
• 申請（專利權(quán)）人: 鐘士江
• 主分類號: A61K49/18
• 分類號: A61K49/18
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11616
• 代理人: 高志軍

本發(fā)明公開了一種靶向標記MMP?2的磁共振分子探針的構(gòu)建方法，所述MRI診斷神經(jīng)膠質(zhì)瘤的新型分子探針由超順磁氧化鐵納米顆粒(superparamagneticironoxidenanoparticles，USPIO)和基質(zhì)金屬蛋白酶?2抗體(MMP2Ab)通碳二亞胺法合成。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點在于：USPIO?PEG?MMP2Ab不僅具有更高的磁飽和強度及弛豫率，且具有良好的生物相容性，經(jīng)靜脈給藥后能主動靶向膠質(zhì)瘤細胞，在磁共振T2WI上產(chǎn)生明顯的“陰性對比”效果，并通過磁共振分子成像完成對腦膠質(zhì)瘤的定性與分級診斷。

技術(shù)領(lǐng)域

涉及一種分子探針及其制作方法，特別是一種利用核磁共振技術(shù)(MRI)診斷神經(jīng)膠質(zhì)瘤的分子探針及其制作方法，屬于醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域。

背景技術(shù)

膠質(zhì)瘤是原發(fā)性人腦腫瘤中的一類惡性疾病，罹患者大多不到5年的生存率，惡性程度高。膠質(zhì)瘤的治療是世界醫(yī)學(xué)難題，盡管近年來膠質(zhì)瘤在手術(shù)、化療與放療方面取得很大進步，但其治療效果并沒有得到顯著提高，很大一部分原因是由于其發(fā)病部位位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，且其相當一部分會浸潤遷移至外周組織，所以了解膠質(zhì)瘤侵襲的分子機制對其早期診斷、明確分級、確定治療方案有著關(guān)鍵性的作用。目前，腦膠質(zhì)瘤的定性診斷主要依靠病理切片檢查，根據(jù)病理結(jié)果評估患者預(yù)后并選擇治療方法。然而，這種侵入性檢查手段不僅給病人帶來痛苦同時還會引起出血、腦損傷等并發(fā)癥。傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查方法如CT、MRI所提供的診斷信息有限，不僅不能做到準確分級，甚至難以將腦膠質(zhì)瘤同脫髓鞘性疾病、炎性假瘤、感染等中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變相鑒別。

分子影像學(xué)是近年來興起的，利用現(xiàn)有影像學(xué)技術(shù)對人體內(nèi)部生理或病理過程在分子水平上進行的非侵入性的、實時監(jiān)測的成像技術(shù)。尋找不同疾病中異常變化的標志性生物分子，開發(fā)針對疾病靶標的特異性探針是實現(xiàn)分子水平診斷的基礎(chǔ)和關(guān)鍵。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族是一類結(jié)構(gòu)中含Zn2+和Ca2+的蛋白水解酶類，主要分解細胞外基質(zhì)蛋白酶類成分，包括發(fā)育、組織塑形、炎癥、退行性疾病、腫瘤生長、侵襲與轉(zhuǎn)移、血管生成等生理病理過程，其中當過表達MMP2時能促進膠質(zhì)瘤的轉(zhuǎn)移，因此利用分子影像學(xué)技術(shù)可以實現(xiàn)對膠質(zhì)瘤的特異性靶向。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，為解決以上現(xiàn)有難題，實現(xiàn)對膠質(zhì)瘤的主動靶向，發(fā)明了一種新型的MRI分子探針USPIO-PEG-MMP2Ab。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：一種靶向標記MMP-2的磁共振分子探針的構(gòu)建方法，所述MRI診斷神經(jīng)膠質(zhì)瘤的新型分子探針由超順磁氧化鐵納米顆粒(superparamagneticironoxidenanoparticles，USPIO)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2抗體(MMP2Ab)通碳二亞胺法合成。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的優(yōu)點在于：USPIO-PEG-MMP2Ab不僅具有更高的磁飽和強度及弛豫率，且具有良好的生物相容性，經(jīng)靜脈給藥后能主動靶向膠質(zhì)瘤細胞，在磁共振T2WI上產(chǎn)生明顯的“陰性對比”效果，并通過磁共振分子成像完成對腦膠質(zhì)瘤的定性與分級診斷。

作為改進，高溫分解法合成USPIO-PEG超順磁氧化鐵納米顆粒：

1.稱取15gPEG加入50ml三口圓底燒瓶中；

2.200ml/min的氬氣環(huán)境下，磁力攪拌10min勻速升溫至80℃；

3.加入0.7g乙酰丙酮鐵后保溫10分鐘，然后以7.2℃/min，25min內(nèi)升溫至260℃，保溫1h，停止加熱，自然冷卻至60℃左右；

4.所得產(chǎn)物用60ml甲苯超聲清洗，并置于磁鐵上吸附，使用甲苯、丙酮依次超聲清洗取下層黑色沉淀即為USPIO-PEG。

作為改進，合成USPIO-PEG-MMP2Ab探針

1.取USPIO-PEG(1mgFe，3.5mg/ml)加入2mLEP管中；