[發明專利]一種Ce6標記的雙鏈抗菌肽及其合成方法和應用

有效

• 申請號: 201910342748.2
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN110028557B
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 王建浩;雷曉玲;周舒文;崔朋飛;邱琳;柳麗;劉曉騫;賈文靜
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00;C07K1/20;C07K1/13;C07K1/06;C07K1/04;A61P31/04
• 代理公司: 常州市英諾創信專利代理事務所(普通合伙) 32258
• 代理人: 謝新萍

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種Ce6標記的雙鏈抗菌肽及其合成方法和應用，該抗菌肽為雙鏈多肽，其氨基酸序列為：本發明還通過引入光敏劑Ce6進行光動力抗菌化學療法(PACT)抗菌，利用它在激光的照射下產生活性氧(ROS)導致微生物分子氧化并導致細胞損傷和死亡，與抗菌肽(AMP)產生協同作用。本發明還公開了此抗菌肽的合成方法及其在治療金黃色葡萄球菌感染的藥物開發或抗菌劑中的應用。采用固相化學法合成，與傳統單鏈抗菌肽相比具有序列短、結構穩定、抗菌活性強、合成方便的優點。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種具有抗菌性能以及光動力治療潛力的新型抗菌劑。

背景技術

自青霉素于20世紀40年代首次引入醫療實踐以來，已開發出大量各種抗生素以成功地抑制臨床中的細菌感染疾病。然而，在醫學治療中已廣泛報道了細菌對大多數抗生素產生抗性，并且目前已成為對公眾健康的嚴重威脅。因此，迫切需要設計新型抗微生物劑和替代治療策略，其可有效殺死具有強效耐藥性的細菌菌株。

微生物滅活的一種是基于光動力抗菌化學療法(PACT)有希望的方法，當使用Ce6作為光敏劑(PS)激活活性氧時(暴露在合適的波長)?；罨膯尉€態氧物質可以用作高反應性氧化劑，并且能夠破壞緊密接近的細胞壁和膜，從而導致細胞死亡。

抗菌肽是生物體內經誘導而產生的一類具有抗菌活性的堿性多肽物質，分子量在2000～7000左右，由20～60個殘基組成。這類活性多肽多數具有強堿性、熱穩定性以及廣譜抗菌等特點。抗菌肽的抑菌機理與抗生素不同，它是通過物理滲透作用于細菌細胞膜，破壞膜上磷脂雙分子層，從而使膜內物質外流，導致細菌死亡，因此，抗菌肽不產生耐藥性。此外，抗菌肽本身是一種多肽類物質，能夠在生物體內有效降解，不存在殘留性問題，所以抗菌肽是抗生素最理想的替代物，具有極為廣闊的市場應用前景。但現有天然抗菌肽在動物體內含量極微，且從動物體內提取抗菌肽產量低、耗時長、工藝復雜、成本高，這限制了天然抗菌肽進入應用。

發明內容

近年來，人工合成多肽的醫療效果引起了人們的高度關注。其中抗菌肽可以作為一種新型的抗生素，把細胞膜作為主要靶點，通過在細胞膜上聚集使其喪失其屏蔽功能，進而導致細胞死亡。

本發明的目的在于：為了解決現有技術中的不足，提供了一種結構簡單，抗菌活性高的雙鏈抗菌肽的合成方法及其應用，本發明合成的雙鏈抗菌肽具有較好的抗菌效果，在抑菌、殺菌以及光動力抗菌化學療法(PACT)等領域均有廣泛的應用前景。為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明提供的抗菌肽的氨基酸序列為：

本發明還提供了抗菌肽的合成方法，包括：

(1)采用固相合成法合成雙鏈抗菌肽；

(2)Ce6標記抗菌肽(AMP-Ce6)。

抗菌肽的合成方法具體為：

1、基本材料：

固相Fmoc法選擇的樹脂為Rink-Amide-MBHA-Resin樹脂。這種樹脂成本低廉且具有非常好的溶脹性，可以使肽鏈之間更好地進行縮合反應，且有足夠的網絡空間滿足不斷增長的肽鏈。采用HBTU和HOBt作為連接分子，將多肽分子固定到樹脂上。

2、反應步驟：

第一步，樹脂預處理。

取100mg樹脂(MBHA)和DMF于反應容器中，混合1h后，抽濾。用20％哌啶(溶于DMF)切割保護基團。

第二步，將第一個氨基酸共價連接到樹脂上。