[發明專利]川桑色氨酸羥化酶T5H2及其應用

在審

• 申請號: 201910342321.2
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN111849931A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 趙愛春;鄭莎;劉長英;朱映雪;張帥;夏中強;向仲懷
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12P17/10
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

1.一種川桑色氨酸羥化酶T5H2，其特征在于：所述色氨酸羥化酶T5H2的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根據權利要求1所述川桑色氨酸羥化酶T5H2，其特征在于：編碼川桑色氨酸羥化酶T5H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一種川桑色氨酸羥化酶基因T5H2，其特征在于：所述川桑色氨酸羥化酶基因T5H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.權利要求1所述川桑色氨酸羥化酶T5H2在作為色胺轉化為5-羥色胺的催化劑中的應用。

5.權利要求3所述川桑色氨酸羥化酶基因T5H2在宿主細胞中重建褪黑素合成途徑中的應用，其特征在于：所述T5H2為催化色胺轉化為5-羥色胺的關鍵酶基因。

6.一種制備重組川桑色氨酸羥化酶T5H2的方法，其特征在于：所述將如SEQ ID NO.3所示的川桑色氨酸羥化酶基因T5H2連入Pcold-tf質粒KpnⅠ和ECORI酶切位點，獲得重組表達載體Pcold-tf-T5H2，再將獲得的重組表達載體轉化表達菌株B21(DE3)，在28℃、IPTG終濃度為1mM條件下誘導表達，提取，純化，獲得重組川桑色氨酸羥化酶T5H2。

7.根據權利要求6所述制備重組氨酸羥化酶T5H2的方法，其特征在于：所述提取的方法是收集菌體，在功率為200W條件下超聲破碎，超聲總時間15min，每超聲1s，暫停3s；然后在4℃、15000g條件下離心20min，收集上清。

8.根據權利要求6所述制備重組川桑氨酸羥化酶T5H2的方法，其特征在于：所述純化是使用鎳柱純化，用含咪唑濃度為100mM的洗脫液進行洗脫。

9.由權利要求6～8任一項所述的方法制得的重組川桑氨酸羥化酶T5H2。

10.權利要求9所述重組川桑氨酸羥化酶T5H2在作為色胺轉化為5-羥色胺的催化劑中的應用。