[發明專利]用于篩選LRPPRC調控劑的產品及鑒定LRPPRC調控劑的方法

有效

• 申請號: 201910340208.0
• 申請日: 2019-04-25
• 公開（公告）號: CN110058014B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 方曉紅;周衛;徐麗;張振;趙立波
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/533;G01N33/68;G01N21/64
• 代理公司: 北京辰權知識產權代理有限公司 11619
• 代理人: 佟林松

本發明實施例公開了一種用于篩選LRPPRC調控劑的產品及鑒定LRPPRC調控劑的方法，包括試劑盒和裝置，試劑盒包括重組LRPPRC蛋白、GST蛋白、熒光素標記的核酸適配體R14、以及熒光素標記的對照核酸；裝置包括多孔板和熒光偏振信號檢測儀。本發明實施例使用短的核酸適配體，核酸適配體相比天然存在的RNA及DNA序列來講具有更加短的序列與分子量，這保證了篩選過程中偏振信號檢測窗口足夠大，使得檢測信噪比有很好的保證；無需預先對目標蛋白進行精細的晶體結構分析，可以極大的降低了藥物篩選的門檻；該篩選方法對于核酸結合蛋白具有很好的通用性，極易推廣。

技術領域

本發明實施例涉及生物醫藥領域，特別涉及一種用于篩選LRPPRC調控劑的產品及鑒定LRPPRC調控劑的方法。

背景技術

分子靶向治療是現階段疾病治療的理論基礎，包括腫瘤、心血管系統、神經系統疾病都急切需要臨床可用的特異性分子抑制劑。現階段，針對蛋白靶點的藥物設計開發主要局限在以下兩方面：第一主要針對具有激酶活性的生物進行藥物開發，開發的靶向性藥物也主要以抑制蛋白的酶活性為主，如癌癥治療中的吉非替尼抑制EGFR激酶活性、達沙替尼抑制SRC激酶活性、心血管系統他汀類藥物抑制HMG-CoA還原酶活性等等。然而細胞內真正具有酶活性的蛋白質種類只占蛋白總數的很少比例，并且能作為藥物靶點的蛋白酶類則更少了。第二針對蛋白酶類的酶活性抑制劑設計篩選極度依賴于對蛋白結構的理解基礎，在缺少蛋白晶體結構的前提下，蛋白抑制劑的篩選將面臨極大的挑戰。因此，亟需針對更多的、尤其是非酶類的蛋白靶點開發有效的藥物篩選體系，來提高分子靶向治療的效率。

核酸結合蛋白是一類可以特異性的和核酸結合的一個蛋白家族，根據結合的核酸類型可分為RNA結合蛋白和DNA結合蛋白。該類蛋白質一般具有保守的核酸結合域，該結構域可以選擇性的與具有特定堿基序列的RNA或者DNA結合。現已經證實，核酸結合蛋白在DNA復制、DNA損傷修復、基因轉錄、蛋白翻譯等幾乎所有的生命活動過程中發揮著至關重要的作用，在諸如惡性腫瘤、心腦血管疾病、傳染性疾病等人類生命健康相關的疾病中起著不可或缺的作用。以RNA結合蛋白LRPPRC為例，要想篩選到能阻斷LRPPRC與RNA結合的小分子調控劑，需要知道LRPPRC結合的核酸特征，也就是保守的結合功能域(motif)，但是很多時候無法知曉絕大部分的LRPPRC結合RNA的motif，即使已知LRPPRC結合mRNA的motif，體外轉錄、回收獲得RNA也存在很復雜的操作流程，并且RNA容易降解，容易導致系統不穩定。因此亟需提供一種更穩定、更通用、更靈敏的鑒定LRPPRC調控劑的方法。

發明內容

本發明實施方式的目的在于提供一種用于篩選LRPPRC調控劑的產品及鑒定LRPPRC調控劑的方法，提供了一種更穩定、更通用、更靈敏的以核酸結合蛋白為靶點的鑒定LRPPRC調控劑的方法。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種用于篩選LRPPRC調控劑的產品，包括試劑盒和裝置，所述試劑盒包括重組LRPPRC蛋白、GST蛋白、熒光素標記的核酸適配體R14、以及熒光素標記的對照核酸；所述裝置包括多孔板和熒光偏振信號檢測儀。

進一步，所述重組LRPPRC的濃度與GST蛋白濃度相同，均為14-136μg/mL，優選68-120μg/mL。

進一步，所述核酸適配體R14的序列為GGTGGGTGGGTTGGGTGG，所述對照核酸的序列為AATTTTTTAATTATTTATATTA；所述熒光標記的核酸適配體R14與熒光標記的對照核酸濃度相同，儲備液濃度均為100nM，工作液濃度均為10^-8M。

進一步，所述熒光偏振信號檢測儀是酶標儀，優選Infinite M1000PRO platereader酶標儀。

進一步，所述產品用于篩選LRPPRC蛋白負調控劑或C端結合劑。

本發明還提供一種基于熒光偏振信號檢測鑒定LRPPRC調控劑的方法，包括：