[發(fā)明專利]用于篩選LRPPRC調(diào)控劑的產(chǎn)品及鑒定LRPPRC調(diào)控劑的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910340208.0 | 申請(qǐng)日： | 2019-04-25 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN110058014B | 公開（公告）日： | 2021-06-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 方曉紅;周衛(wèi);徐麗;張振;趙立波 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)科學(xué)院化學(xué)研究所 |
| 主分類號(hào)： | G01N33/535 | 分類號(hào)： | G01N33/535;G01N33/533;G01N33/68;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京辰權(quán)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11619 | 代理人： | 佟林松 |
| 地址： | 100190 *** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 篩選 lrpprc 調(diào)控 產(chǎn)品 鑒定 方法 | ||
1.一種基于熒光偏振信號(hào)檢測(cè)鑒定LRPPRC調(diào)控劑的方法，其特征在于，所述LRPPRC調(diào)控劑為GAA，所述GAA用于抑制LRPPRC蛋白與核酸的結(jié)合，包括以下步驟：
1)原核表達(dá)純化LRPPRC蛋白和GST蛋白；
2)通過SELEX篩選，得到與LRPPRC結(jié)合蛋白特異性結(jié)合的核酸適配體R14，將得到的核酸適配體R14進(jìn)行熒光素標(biāo)記，并熒光標(biāo)記對(duì)照核酸，所述對(duì)照核酸的序列為AATTTTTTAATTATTTATATTA；
3)分別將LRPPRC蛋白與熒光標(biāo)記的核酸適配體R14混合、將LRPPRC蛋白與熒光標(biāo)記對(duì)照核酸混合、將熒光標(biāo)記的核酸適配體R14與GST蛋白混合，加入多孔板不同的孔中；
4)向各孔中加入GAA；
5)以熒光偏振信號(hào)檢測(cè)儀檢測(cè)步驟3)中各混合物的熒光偏振信號(hào)。
2.如權(quán)利要求1所述基于熒光偏振信號(hào)檢測(cè)鑒定LRPPRC調(diào)控劑的方法，其特征在于，所述步驟3)進(jìn)一步包括DMSO空白對(duì)照。
3.如權(quán)利要求1所述基于熒光偏振信號(hào)檢測(cè)鑒定LRPPRC調(diào)控劑的方法，其特征在于，所述LRPPRC、GST蛋白的反應(yīng)濃度均為120μg/mL，所述熒光標(biāo)記的核酸適配體R14、熒光標(biāo)記對(duì)照核酸的反應(yīng)濃度均為40nM；所述GAA的工作濃度為24μM。
4.如權(quán)利要求2所述基于熒光偏振信號(hào)檢測(cè)鑒定LRPPRC調(diào)控劑的方法，其特征在于，采集所述孔板上每個(gè)孔的熒光信號(hào)以及偏振光信號(hào)；與DMSO孔的信號(hào)進(jìn)行歸一化處理，加入GAA后，所述孔的偏振光信號(hào)的抑制率大于50％；且熒光信號(hào)自身的變化小于1.5倍的GAA即為L(zhǎng)RPPRC負(fù)調(diào)控劑。
5.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述基于熒光偏振信號(hào)檢測(cè)鑒定LRPPRC調(diào)控劑的方法，其特征在于，所述方法為高通量篩選方法。
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