[發明專利]一種基于雙鏈DNA包被的Ag納米簇及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201910337318.1
• 申請日: 2019-04-25
• 公開（公告）號: CN110272728A
• 公開（公告）日: 2019-09-24
• 發明（設計）人: 凌劍;文秋林;劉安勇;彭君;胡怡琳
• 申請（專利權）人: 云南大學
• 主分類號: C09K11/02
• 分類號: C09K11/02;G01N21/64;B82Y20/00;B82Y30/00
• 代理公司: 北京市盈科律師事務所 11344
• 代理人: 羅東

本發明公開了一種基于雙鏈DNA包被的Ag納米簇及其制備方法與應用，屬于Ag納米簇技術領域。本發明基于雙鏈DNA包被的Ag納米簇，其DNA為雙鏈結構，一條鏈為模板鏈DNA，另一條鏈為富含G堿基DNA；其中模板鏈DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，富含G堿基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；或者模板鏈DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，富含G堿基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本發明模板鏈DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，富含G堿基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的雙鏈DNA/Ag納米簇證實待檢測體系中不存在半胱氨酸和多巴胺的情況下，可使用模板鏈DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，富含G堿基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的雙鏈DNA/Ag納米簇來檢測體系中是否含有抗壞血酸，并進行定量分析。

技術領域

本發明涉及一種基于雙鏈DNA包被的Ag納米簇及其制備方法與應用，屬于Ag納米簇技術領域。

背景技術

寡核苷酸包被的銀納米簇(DNA/Ag納米簇)具有熒光量子產量高、光穩定性好、良好的生物相容性、大的斯托克斯位移等優點，被廣泛應用于環境監測和生化分析等領域，備受科研工作者的關注。

目前已有許多文獻報導了關于DNA/Ag納米簇的應用研究：如對金屬離子、含巰基化合物、生物小分子、蛋白質和DNA的檢測和在細胞成像方面的研究。

現有寡核苷酸包被的銀納米簇(DNA/Ag納米簇)的缺陷有：DNA序列的選擇直接影響其熒光及應用，目前許多文獻報導了堿基序列、數目等因素對DNA/Ag納米簇的熒光及應用的影響，但并沒有關于富G堿基序列包被單鏈DNA/Ag納米簇程度的不同對DNA/Ag納米簇的影響及應用的研究；目前有許多方法對各種生物還原劑的檢測分析，但還沒有利用不同包被程度的DNA/Ag納米簇來選擇性識別抗壞血酸的研究。

發明內容

針對現有技術中寡核苷酸包被的銀納米簇(DNA/Ag納米簇)的缺陷，本發明提出一種基于雙鏈DNA包被的Ag納米簇及其制備方法與應用，即合成兩種包被程度不同的富含G堿基DNA/Ag納米簇，從而使其具有檢測分析抗壞血酸的功能。

一種基于雙鏈DNA包被的Ag納米簇：DNA為雙鏈結構，一條鏈為模板鏈DNA，另一條鏈為富含G堿基DNA；其中模板鏈DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，富含G堿基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；或者模板鏈DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，富含G堿基DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。所述基于雙鏈DNA包被的Ag納米簇的制備方法，具體步驟如下：

(1)將模板鏈DNA凍干粉冷凍離心，然后將模板鏈DNA溶于20～100mol/mL磷酸鹽緩沖液中得到模板鏈DNA緩沖液；

(2)將4～40μmol/mL AgNO₃溶液加入到步驟(1)模板鏈DNA緩沖液中，快速振蕩15～30s后置于避光條件下反應20～30min得到反應體系A；

(3)將1.6～60μmmol/mL NaBH₄溶液加入至步驟(2)的反應體系A中，快速振蕩15～30s后置于暗室條件下反應6～18h即得單鏈DNA/Ag納米簇溶液，然后置于避光、溫度為4～8℃的冰箱中保存備用；

(4)將富含G堿基DNA溶液和步驟(3)的單鏈DNA/Ag納米簇溶液混合均勻，再加入磷酸緩沖鹽溶液混合均勻，然后在避光條件下反應至兩條DNA鏈完全雜交即得基于雙鏈DNA包被的Ag納米簇。

所述步驟(1)磷酸鹽緩沖液的濃度為20～100mmol/L，磷酸鹽緩沖液的pH為6.5～7.5。

所述步驟(1)模板鏈DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示或如SEQ ID NO.2所示。