[發(fā)明專利]一種具有生物抗菌作用的糞腸球菌在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910336138.1 | 申請日： | 2019-04-24 |
| 公開（公告）號： | CN110527642A | 公開（公告）日： | 2019-12-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 謝晶;沈勇;劉文茹;梅俊;王金鋒 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海海洋大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12R1/01 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201306 上海市浦東新*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 保藏 菌株 糞腸球菌 金黃色葡萄球菌 中國微生物菌種 革蘭氏陽性菌 革蘭氏陰性菌 生物保鮮技術(shù) 大腸桿菌 食用安全性 水產(chǎn)品保鮮 微生物中心 抗菌作用 生物抗菌 抑菌作用 應(yīng)用潛力 貨架期 水產(chǎn)品 管理 | ||
一種具有生物抗菌作用的糞腸球菌，屬于生物保鮮技術(shù)及水產(chǎn)品保鮮技術(shù)領(lǐng)域，該菌株能夠產(chǎn)生具有抗菌作用的物質(zhì)，該糞腸球菌于2019年01月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCCNo.17173。該菌株對金黃色葡萄球菌（革蘭氏陽性菌）和大腸桿菌（革蘭氏陰性菌）具有抑菌作用。因此，該菌株在延長水產(chǎn)品貨架期和提高食用安全性上具有較大的應(yīng)用潛力和價(jià)值。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物保鮮技術(shù)及水產(chǎn)品保鮮技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種糞腸球菌及其產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)。
背景技術(shù)
我國是水產(chǎn)品生產(chǎn)與消費(fèi)大國，由于其營養(yǎng)豐富，在運(yùn)輸和貯藏加工過程中，很容易引起腐敗變質(zhì)。其中，大腸桿菌（
目前，保鮮劑的研究主要是食品防腐劑等化學(xué)防腐劑。添加食品防腐劑是降低微生物和酶活性、延長水產(chǎn)品保質(zhì)期的重要途徑之一，但是人工合成的防腐劑不僅對水產(chǎn)品的風(fēng)味、品質(zhì)帶來不良影響，并且可能隨水產(chǎn)品一起被人體攝取，而過量攝入也會對人體健康產(chǎn)生不良影響。隨著人民生活水平的提高，生鮮水產(chǎn)品的需求量不斷增加，同時(shí)對其鮮度品質(zhì)要求也在逐漸提高，因此，尋求一種安全、綠色、高效的保鮮方法尤為重要。
利用具有生物拮抗的菌株作為保鮮劑，來抑制腐敗菌的增長，在天然防腐的商業(yè)領(lǐng)域具有巨大的開發(fā)潛力，然而關(guān)于具有生物拮抗保鮮作用的菌株的還鮮有報(bào)道。海生生物與陸生生物相比，由于生活環(huán)境的差異，兩者具有許多不同的生理特性，進(jìn)而其腸道內(nèi)微生物的代謝途徑不同，因此探索和發(fā)現(xiàn)海生生物腸道中作用獨(dú)特、效果良好的產(chǎn)抗菌物質(zhì)的菌源，以應(yīng)用于水產(chǎn)品低溫貯藏運(yùn)輸方面，具有很廣闊的市場應(yīng)用前景。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株具有生物抗菌作用的糞腸球菌。
本發(fā)明提供的菌株為一種糞腸球菌，所述的糞腸球菌（Enterococcus faecalis）于2019年1月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(地址： 北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號)，菌種保藏號為CGMCC NO. 17173 。
進(jìn)一步，糞腸球菌生物學(xué)特性為：球形；菌落形態(tài)為白色光滑凸起、有光澤、圓形、革蘭氏陽性、過氧化氫酶陰性。
進(jìn)一步，所述糞腸球菌的篩選方法為：以花鱸魚腸道為來源，篩選具有生物拮抗作用的菌，并研究對比其抑菌效果和抑菌譜；具體操作步驟如下：
(1) 從水產(chǎn)品市場購買花鱸魚后，半小時(shí)內(nèi)4℃低溫保鮮盒運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室；
(2)在無菌環(huán)境下取出花鱸魚腸道，并用無菌手術(shù)剪刀將其充分剪碎混勻，加入含有25mL的無菌生理鹽水中重復(fù)充分振蕩搖勻，制成原液，吸取1 mL做梯度稀釋；
(3)取(2)中所提及的原液和進(jìn)行的10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6梯度稀釋的稀釋液涂布于含有溴甲酚紫的MRS固體培養(yǎng)基上，在30 ℃培養(yǎng)48-84 h, 用接種針挑取黃色的單菌落，在MRS平板上劃線分離，傳代培養(yǎng)2~4次直至純化；對每株菌株進(jìn)行革蘭氏染色和過氧化氫酶試驗(yàn)后，選擇革蘭氏陽性、過氧化氫酶陰性的菌株保存；
(4) 將保存的菌株活化后，以1~5%接種量接種于MRS肉湯培養(yǎng)基中，在30℃下靜置培養(yǎng)24-48h，將發(fā)酵液在6000~12000 r/min下離心10-30 min，得到無細(xì)胞上清液，再進(jìn)行凍干保存、備用；
（5）在BHI液體培養(yǎng)基中分別接種大腸桿菌、金黃色葡萄球菌，在溫度為30 ℃，轉(zhuǎn)速為120 r/min的搖床下培養(yǎng)12小時(shí)，使得大腸桿菌和金黃色葡萄球菌處于生長的對數(shù)期，獲得了大腸桿菌的菌液和金黃色葡萄球菌的菌液；
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