[發(fā)明專利]一種利用熒光各向異性技術(shù)檢測(cè)赭曲霉毒素A的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910333746.7
• 申請(qǐng)日: 2019-04-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110117641B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙強(qiáng);李亞飄
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心
• 主分類號(hào): C12Q1/6816
• 分類號(hào): C12Q1/6816
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 秦夢(mèng)楠

1.一種檢測(cè)赭曲霉毒素A的方法，包括如下步驟：將熒光染料標(biāo)記的核酸適配體、鏈霉親和素標(biāo)記的單鏈DNA分子和待測(cè)樣本共同反應(yīng)，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)體系的熒光各向異性值實(shí)現(xiàn)對(duì)待測(cè)樣本中赭曲霉毒素A的檢測(cè)；

所述核酸適配體能夠特異性結(jié)合赭曲霉毒素A；

所述單鏈DNA分子能夠與所述核酸適配體的部分序列反向互補(bǔ)形成雙鏈結(jié)構(gòu)；當(dāng)形成雙鏈結(jié)構(gòu)后，熒光染料和鏈霉親和素位于雙鏈結(jié)構(gòu)的同一末端，兩者在空間上鄰近；

所述“熒光染料和鏈霉親和素位于雙鏈結(jié)構(gòu)的同一端，兩者在空間上鄰近”是通過(guò)如下（a1）或（a2）所示的方式實(shí)現(xiàn)的：

（a1）當(dāng)單鏈DNA分子與核酸適配體的自5’末端起部分序列反向互補(bǔ)時(shí)，所述熒光染料標(biāo)記于核酸適配體的5’ 末端，所述鏈霉親和素標(biāo)記于單鏈DNA分子的3’ 末端；

（a2）當(dāng)單鏈DNA分子與核酸適配體的自3’ 末端起部分序列反向互補(bǔ)時(shí)，所述熒光染料標(biāo)記于核酸適配體的3’ 末端，所述鏈霉親和素標(biāo)記于單鏈DNA分子的5’ 末端。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述熒光染料為熒光素FAM。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于：

所述核酸適配體為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

所述單鏈DNA分子為如下（b1）-（b8）中的任一種：

（b1）序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

（b2）序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

（b3）序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

（b4）序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

（b5）序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；

（b6）序列表的序列7所示的單鏈DNA分子；

（b7）序列表的序列8所示的單鏈DNA分子；

（b8）序列表的序列9所示的單鏈DNA分子。

4.一種DNA分子組合，由熒光染料標(biāo)記的核酸適配體和鏈霉親和素標(biāo)記的單鏈DNA分子組成；所述核酸適配體能夠特異性結(jié)合赭曲霉毒素A；所述單鏈DNA分子能夠與所述核酸適配體的部分序列反向互補(bǔ)形成雙鏈結(jié)構(gòu)；當(dāng)形成雙鏈結(jié)構(gòu)后，熒光染料和鏈霉親和素位于雙鏈結(jié)構(gòu)的同一末端，兩者在空間上鄰近；

所述“熒光染料和鏈霉親和素位于雙鏈結(jié)構(gòu)的同一端，兩者在空間上鄰近”是通過(guò)如下（a1）或（a2）所示的方式實(shí)現(xiàn)的：

（a1）當(dāng)單鏈DNA分子與核酸適配體的自5’末端起部分序列反向互補(bǔ)時(shí)，所述熒光染料標(biāo)記于核酸適配體的5’ 末端，所述鏈霉親和素標(biāo)記于單鏈DNA分子的3’ 末端；

（a2）當(dāng)單鏈DNA分子與核酸適配體的自3’ 末端起部分序列反向互補(bǔ)時(shí)，所述熒光染料標(biāo)記于核酸適配體的3’ 末端，所述鏈霉親和素標(biāo)記于單鏈DNA分子的5’ 末端。

5.如權(quán)利要求4所述的DNA分子組合，其特征在于：所述熒光染料為熒光素FAM。

6.如權(quán)利要求4或5所述的DNA分子組合，其特征在于：

所述核酸適配體為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；

所述單鏈DNA分子為如下（b1）-（b8）中的任一種：

（b1）序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；

（b2）序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；

（b3）序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；

（b4）序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；

（b5）序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；

（b6）序列表的序列7所示的單鏈DNA分子；

（b7）序列表的序列8所示的單鏈DNA分子；

（b8）序列表的序列9所示的單鏈DNA分子。

7.權(quán)利要求4至6任一所述的DNA分子組合的應(yīng)用，為如下（c1）或（c2）：

（c1）檢測(cè)赭曲霉毒素A；

（c2）制備用于檢測(cè)赭曲霉毒素A的試劑盒。

8.含有權(quán)利要求4至6任一所述的DNA分子組合的試劑盒；所述試劑盒的用途為檢測(cè)赭曲霉毒素A。