[發明專利]一種抗植物病毒ε-聚賴氨酸高產菌株及制備工藝

有效

• 申請號: 201910330737.2
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN110055203B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 吳元華;劉鶴;安夢楠;夏子豪;陳建光;夏博;趙秀香
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P13/02;C12R1/465
• 代理公司: 北京君泊知識產權代理有限公司 11496
• 代理人: 李丹

1.一種抗植物病毒ε-聚賴氨酸的高產菌株，其特征在于該高產菌株的名稱為細黃鏈霉菌遼寧變種(Streptomyces microflavus var.liaoningensis)X，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.15355，保藏日期為2018年2月12日。

2.一種抗植物病毒ε-聚賴氨酸的制備工藝，其特征在于所述制備工藝采用權利要求1所述的一種抗植物病毒ε-聚賴氨酸的高產菌株，且包括以下步驟：

(1)菌種擴繁過程：將所述細黃鏈霉菌遼寧變種(Streptomyces microflavusvar.liaoningensis)X接種到裝有經20-40min滅菌后的種子培養基的種子罐中培養30～60小時制備得到種子液，控制所述種子罐的培養條件為溫度范圍25～35℃，pH范圍7.0～7.4，壓強范圍0.05～0.2Mpa；所述種子培養基按重量百分含量計的組成為玉米粉為2.0％、花生餅粉3.0％、淀粉1.0％、酵母粉0.05％、氯化鈉1.5％、硫酸銨0.02％、七水合硫酸鎂0.002％、磷酸氫二鉀0.0025％、其余為水；

(2)發酵生成抗植物病毒ε-聚賴氨酸過程：將步驟(1)制備得到的所述種子液接種到裝有經滅菌后的發酵培養基的發酵罐中培養50～70小時制備得到發酵液，控制所述發酵罐培養條件為消毒前pH范圍6.0～7.0，壓強范圍0.1～0.12Mpa，空氣流量范圍1：0.2～1；所述發酵培養基按重量百分含量計的組成為玉米粉2.0％，花生餅粉3.0％，淀粉1.0％，葡萄糖2.0％，酵母粉0.2％，硫酸銨0.4％，硫酸鈣0.4％，碳酸鈣0.4％，氯化鈉0.3％，其余為水；

(3)發酵后成品制備過程：在無菌條件下將加熱使到100℃的所述發酵液壓入板框過濾機，過濾制得清液，用濃度為6N的HCl或草酸調整所述清液的pH值；之后將pH4.0～5.0的所述清液抽入到濃縮罐中進行減壓濃縮，制備得到效價25000u/mL以上的濃縮液，所述減壓濃縮過程控制條件為700mmHg真空度、蒸汽壓0.02～0.06Mpa、溫度70℃～80℃；之后在所述濃縮液中加入穩定劑，助劑，抽樣測定生物效價合格后得到成品。

3.根據權利要求2所述的一種抗植物病毒ε-聚賴氨酸的制備工藝，其特征在于：所述步驟(2)中將種子液接種到裝有經滅菌后的發酵培養基的發酵罐中的接種量為所述種子液占發酵培養基的體積百分比為7.5％～15％，所述種子液的種齡30～40小時。

4.根據權利要求2或3所述一種抗植物病毒ε-聚賴氨酸的制備工藝，其特征在于：所述步驟(2)中需要在發酵罐中加入體積分數為的硅酮消泡劑。

5.根據權利要求4所述一種抗植物病毒ε-聚賴氨酸的制備工藝，其特征在于：所述步驟(3)中穩定劑種類和加入量為發酵液重量百分含量0.08％的苯甲酸鈉或0.05～1.5％的對羥基苯甲酸丁酯，所述助劑為Tween 80。